Романовского и 1 мл 0,5% раствора глицерина в дистиллированной воде и оставляют на 5 минут. Микропрепарат заливают горячим раствором краски Романовского трижды, после чего препараты промывают водой и подсушивают на воздухе.
После окраски бледной спирохеты краской Романовского она приобретает розовый цвет с фиолетовым оттенком с хорошо представленными завитками. Другие варианты спирохет окрашиваются значительно ярче.
Недостатком окраски бледной спирохеты азур-эозиновыми смесями является слабая окраска и наличие осадка, который затрудняет исследование. Для избежания осадка необходимо проводить фиксацию в закрытой посуде и чтобы стекла-микропрепараты находились в вертикальном положении. Саму окраску микропрепаратов после их фиксации следует проводить на стеклянном мостике в горизонтальном положении.
А. Я. Альтгаузен (1950) предложил свой метод окраски бледной трепонемы, который оптимизирует диагностику сифилиса. С зтой целью готовят специальную краску, используя метиленовый синий краситель, углекислый натрий и дистиллированную воду.
Специальную краску для окрашивания по методу Альтгаузена готовят следующим образом: 0.5 г обычной метиленовой сини, 0,25 г углекислого натрия (Na2CO3) и 500 мл дистиллированной воды соединяют особым образом. Сначала подогревают в колбе, закрытой ватной пробкой, дистиллированную воду до кипения для удаления углекислоты. После охлаждения в воду добавляют углекислый натрий, а затем - синьку. Приготовленный раствор переносят в стеклянную емкость объемом 500 мл, которая предварительно была вымыта с последующим полосканием в нескольких дистиллированных водах и простерилизована. Стеклянная посуда с приготовленным раствором краски должна быть закрыта чистой пробкой и оставлена для «дозревания» краски в темном шкафу при комнатной температуре. Через 2-3 недели краска «созревает», о чем свидетельствует превращение первоначального синего цвета в фиолетовый. У готового
красителя образуется метилен-азур, который при взбалтывании дает фиолетовую пену.
Способ окраски бледной трепонемы по Альтгаузену. Высохшие на стекле микропрепараты фиксируют любым способом и окрашивают с использованием приготовленной краски метилен-азура и эозина. Сначала 0,5 мл водного раствора эозина желтоватого цвета, разведенного 1:1000, смешивают с 2,5 мл дистиллированной воды и наливают на фиксированный препарат на 10 минут. По истечении 10 минут краску сливают и, не смывая, наливают подогретую смесь, состоящую из 0,8 мл приготовленной метилен-азурной краски и 2,2 мл дистиллированной воды, на 20 минут. После 20 минут окраски препарат промывают в проточной воде и высушивают на воздухе. Спирохеты сифилиса окрашиваются в ярко красный цвет с наличием мелких множественных завитков (цв. вкл., рис. 69). Такой метод окраски хорошо выделяет бледную трепонему среди других спирохет, которые окрашиваются в синий цвет с немногочисленными грубыми завитками.
Значительным преимуществом такого метода окраски микропрепаратов является полное отсутствие осадка на стеклах.
Выявление бледной трепонемы в темном поле.
Для выявления бледной трепонемы в темном поле необходимо, чтобы биоматериал не содержал эритроцитов и примеси крови, т. к. присутствие красных и белых элементов крови осложняет исследование. Для этого после очистки очага поражения вышеуказанным способом путем сжатия с двух сторон основания язвы или эрозии выдавливается капля серозного экссудата, который забирают или с помощью бактериологической петли и переносят на предметное стекло, или путем прикладывания к поверхности очага поражения предметного стекла. На предметном стекле серозное отделяемое смешивают с равным количеством физиологического раствора, накрывают покровным стеклом и микроскопируют в темном поле.
Отличительными свойствами бледной трепонемы при исследовании в темном поле являются как