45
которые в изолированных тканях активируются. Окисленные фенолы
обычно ингибируют деление и рост клеток, что ведет к гибели первичного
экспланта или уменьшению способности тканей древесных растений к
регенерации адвентивных (придаточных) почек.
Таким образом, в основе метода микроклонирования лежит
уникальная способность растительной клетки реализовывать присущую
ей тотипотентность (воспроизведение растения, генетически
идентичного исходному).
5.1. Факторы, влияющие на процесс микроразмножения
На эффективность размножения влияет ряд факторов различной
природы. Это физиологические особенности вводимого в культуру
растения, химические и физические условия культивирования. Наиболее
важным моментом является выбор материнского растения и экспланта.
При выборе материнского растения необходимо учитывать его
физиологические, сортовые и видовые особенности. Исходные растения
должны быть здоровыми, не пораженными грибными, бактериальными и
вирусными болезнями, находиться в состоянии интенсивного роста.
При выборе экспланта учитывают его возраст, строение и
происхождение. Для обеспечения максимальной стабильности
клонируемого материала желательно использовать молодые, слабо
дифференцированные ткани, которые укореняются лучше, чем зрелые. Для
древесных пород лучше использовать кончики стеблей, пазушные почки,
зародыши, молодые листья, то есть экспланты, содержащие меристемы.
Чем меньше размер экспланта, тем меньше его регенерационная
способность. Однако в крупном экспланте увеличивается возможность
появления в его клетках вирусов и других патогенов, что препятствует
оздоровлению тканей.
При длительном культивировании частота укореняемости побегов
возрастает. Возможно, эксплант приобретает признаки ювенильности, что
ведет к повышению его морфогенетического потенциала.
Эффективность стерилизации также определяется особенностями
экспланта. Внутреннее заражение исходных эксплантов бывает намного
сильнее, чем поверхностное, поэтому экспланты предварительно
обрабатывают фунгицидами и антибиотиками против грибной и
бактериальной инфекции.
Состав питательной среды подбирают с учетом особенностей
каждого вида растений. На клональное микроразмножение влияют
гормоны, минеральные соли, витамины и углеводы. В качестве источника
углеводного питания используют сахарозы, глюкозы, фруктозы, галактозы