Дисертация
  • формат pdf
  • размер 7,55 МБ
  • добавлен 23 сентября 2016 г.
Андреева Ю.В. Химико-токсикологическое исследование отдельных биологически активных веществ производных 3-трифторметиланилина
Диссертация на соискание ученой степени кандидата химических наук. – Курск, КГМУ, 2016. – 329 с.
Специальность 14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия
Цель исследования. Разработка методик изолирования, очистки и определения производных 3-трифторметиланилина (флутамида и его метаболитов) для химико-токсикологического анализа.
Научная новизна. Определены основные ионы характерных кластеров положительно заряженных частиц в масс-спектрах флутамида, 4-нитро- 3-трифторметиланилина, 2-метил-N-(4-амино-3-(трифторметил)фенил)пропанамида и N-(4-ацетамино-3-(трифторметил)фенил)ацетамида после фрагментации их молекул методом электронного удара.
Выявлены и обоснованы оптимальные условия хроматографирования в различных типах сорбентов и рассчитаны параметры, характеризующие хроматографическую активность и особенности разделения производных 3-трифторметиланилина при использовании ряда методов плоскостной и колоночной жидкостной хроматографии (ТСХ, макроколоночной хроматографии низкого давления, ВЭЖХ), а также комбинации методов ГЖХ и масс-спектрометрии.
Разработаны и статистически охарактеризованы методики количественной оценки группы рассматриваемых соединений в субстанциях и извлечениях из биологических матриц на основе применения методов нормальнофазовой и обращённофазовой ВЭЖХ, а также электронной спектрофотометрии.
Выявлены основные параметры и условия очистки соединений рассматриваемой группы от эндогенных веществ биологических матриц с использованием хроматографических (тонкослойная и макроколоночная хроматография) и экстракционных (жидкость-жидкостная экстракция) методов.
Обоснована возможность применения ацетона как наиболее универсального жидкого извлекающего агента для изолирования производных 3-трифтор-метиланилина из биоматериала методом настаивания. Определены оптимальные условия и предложены варианты определения флутамида, 4-нитро- 3-трифторметиланилина, 2-метил-N-(4-амино-3-(трифторметил)фенил)пропанамида и N-(4-ацетамино-3-(трифторметил)фенил)ацетамида в твёрдых (органы и ткани) и жидких (кровь, плазма, моча) биологических матрицах на основе использования ацетона как изолирующего агента и очистки методами жидкость-жидкостной экстракции и хроматографии в тонких слоях и колонках сорбентов.
Выявлены характерные особенности распределения производных 3-трифтор-метиланилина в теплокровных организмах (на примере крыс), отравленных токсическими дозами соединений исследуемой группы.
Установлены сроки, в течение которых соединения рассматриваемой группы сохраняют стабильность в среде гнилостно разлагающихся биологических тканей при трёх различных температурных режимах.
Теоретическая и практическая значимость работы. Установлен рост хроматографической активности производных 3-трифторметиланилина в тонких слоях и колонках нормальнофазовых сорбентов с увеличением полярности подвижных фаз и наличия в молекулах адсорбатов активных центров, способных к образованию с поверхностью сорбента временных связей, в ряду флутамид < 2-метил-N-(4-амино-3-(трифторметил)фенил)пропанамид < 4-нитро-3-трифторметиланилин < N-(4-ацетамино-3-(трифторметил)фенил)ацетамид. Обратная зависимость наблюдается при хроматографировании в обращённофазовых сорбентах. Наибольшая степень экстракции рассматриваемых соединений из водных и смешанных сред достигается сложными эфирами алифатических кислот, причём степень экстракции возрастает с увеличением алкильного радикала в спиртовом фрагменте экстрагента. Степень экстракции возрастает при введении в водную фазу электролитов группы галогенидов К и Na. На степень экстракции не оказывает заметного влияния рН гидрофильных фаз. Из-за малой гидрофильности молекул и невыраженности кислотно-основных свойств производных 3-трифторметиланилина наибольшая их степень извлечения из биоматериала достигается гидролипофильными растворителями, в частности, ацетоном, очистку веществ от эндогенных соединений биологических матриц целесообразно проводить экстракцией из гидрофильных водно-органических сред гидрофобными органическими экстрагентами в сочетании с нормальнофазовым или обращённофазовым вариантами колоночной хроматографии.
нормальнофазовым или обращённофазовым вариантами колоночной хроматографии.
При моделировании отравлений теплокровных смертельными дозами флутамида отравляющее вещество в организме крыс метаболизируется в основном в печени и тонком кишечнике с образованием продукта восстановления – 2-метил-N- (4-амино-3-(трифторметил)фенил)пропанамида.
Выполненный комплекс экспериментов обеспечил возможность разработки двух оригинальных вариантов общей схемы исследования производных 3-трифторметиланилина (флутамида и его метаболитов) при доказательстве отравлений соединениями данной химической группы. Первый вариант предусматривает изолирование рассматриваемых соединений из органов и биожидкостей ацетоном, очистку в колонке силикагеля L 40/100 мкм, идентификацию и количественное определение методами ТСХ, ИК-, электронной спектрофотометрии, ГХ-МС и ВЭЖХ. Второй вариант предусматривает дополнительную очистку экстракцией из водно-ацетонитрильных растворов.