Шпаргалка
  • формат doc
  • размер 147,53 КБ
  • добавлен 30 мая 2013 г.
Генная инженерия
Выходные данные не указаны, 41 вопрос
рестриктирующие нуклеазы. Другие ферменты эндонуклеазного действия (s1 – нуклеаза, bal31 – нуклеаза, ДНК – аза 1).
экзонуклеазы. Экзонуклеазы, действующие на одноцепочечные ДНК. Экзонуклеазы, действующие на двухцепочечные ДНК ( 3’-5’ и 5’3’). Рибонуклеазы (а).
полимеразы. ДНК-зависимые ДНК-полимеразы. ДНК-зависимые РНК-полимеразы. РНК-зависимые ДНК-полимеразы. ДНК-лигазы.
Фосфатазы и киназы. Использование в генной терапии.
векторы на основе репликонов бактериальных плазмид. Суицидные векторы ( sac-ген).
Векторы на основе бактериофагов (лямбда-векторы, фазмиды, космиды) .
Векторы на основе вирусов животных.
Векторы для растительных клеток.
Получение библиотеки ДНК с помощью вирусных или плазмидных векторов.
получение библиотек кДНК из отобранных популяций молекул мРНК.
выявление нужных клонов в генной библиотеке путем гибридизации с радиоактивным ДНК-зондом. Выделение перекрывающихся клонов ДНК («прогулка по хромосоме») с целью идентификации соседних генов. Выявление клонов по активности генов (ферменты, ауксотрофные мутации-комплементация).
Выявление экспрессии генов. Использование flag-векторов, радиоактивное мечение белков, детекция иРНК.
секвенирование ДНК по Максаму-Гилберту. Использование нерадиоактивных меток при секвенировании.
конструирование делеций для секвенирования. Приготовление матриц для секвенирования ДНК.
компьютерный анализ ДНК и кодируемых белков. Использование для анализа баз данных ДНК и белковых последовательностей (genbank, embl, fasta, pir и т.п.)
сайт-специфический мутагенез. Направленный мутагенез с помощью олигонуклеотидов. Мутагенез с использованием ПЦР.
Амплификация ДНК с помощью ПЦР. Амплификация РНК с помощью ПЦР.
использование ПЦР для молекулярной диагностики патогенов человека и животных, для идентификации генетических заболеваний.
элементы для экспрессии белков в E. сoli. Экспрессия белков с использованием т7 РНК-полимеразы и промоторной системы.
экспрессия белков с использованием векторов с регулируемыми элементами фага лямбда. Продукция слитых белков с использованием специальных экспрессирующих векторов.
системы экспрессии на основе бакуловирусов. Продукция больших количеств белков в клетках насекомых.
системы для экспрессии белков в животных клетках. Векторы на основе вирусов животных.
сильные и регулируемые промоторы используемые в векторах для экспрессии белков. Примеры.
электрофоретический анализ белков. Иммуноблоттинг и иммунодетекция.
способы введения ДНК в клетки животных, растений, бактерий, дрожжей.
Конструирование линий клеток, суперпродуцирующих биологически активные вещества
технология получения трансгенных растений и цели и задачи, решаемые с помощью данной технологии.
генная терапия болезней человека и животных, являющихся следствием дефектов генетического аппарата и его функций.
постановка реакции рестрикции и лигирования ДНК. Условия проведения реакций.
Выделение и очистка плазмидной ДНК в миниколичествах.
Методика трансформации клеток e.coli плазмидной ДНК.
Синтетические нуклеотидные последовательности, используемые в генной инженерии: праймеры,адаптеры,линкеры.
секвенирование ДНК по Сэнгеру.
Гибридизация ДНК. Перенос по Саузерну
Генная инженерия дрожжей. Векторы для дрожжевых клеток.
Генная инженерия бацилл и других грамположительных бактерий.
Новые подходы к анализу экспрессии генома: использование микропланшетной техники для анализа реакции всего генома на внешние воздействия.
Новые подходы к анализу экспрессии генома: использование двухгибридных систем для анализа белок-белковых взаимодействий.
технология получения животных с полезными свойствами и цели и задачи, решаемые с помощью данной технологии.
Векторы и приемы используемые в генной терапии
Фаг м13 Фаговый дисплей. Использование для детекции активных доменов белков.