Диссертация на соискание ученой степени кандидата
биологических наук. Специальность: 03.03.01 – физиология;
03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология. НГМУ. Нижний
Новгород. 2014. — 147 с. Научный руководитель: доктор биологических
наук, профессор И.В.Мухина.
Целью работы явилось изучение антигипоксических и
нейропротекторных свойств N-ADA при моделировании острой гипоксии в
культуре клеток гиппокампа и острой гипобарической гипоксии in
vivo.
Научная новизна. Впервые выявлены ранние и отдаленные эффекты, оказываемые N- ADA на индуцированные острой нормобарической гипоксией изменения спонтанной биоэлектрической активности нейронной сети в культуре клеток гиппокампа, проявляющиеся в поддержании сетевой биоэлектрической активности нейронов в период гипоксии, а также сохранении паттерна сетевой пачки импульсов в отдаленном постгипоксическом периоде.
Научно-практическая значимость. Полученные результаты расширяют имеющиеся фундаментальные знания о нейропротекторной роли N-ADA и выявляют его антигипоксические свойства. Показано, что превентивная аппликация N- ADA при моделировании острой гипоксии in vitro поддерживает функциональную активность нейронных сетей в культуре клеток гиппокампа мыши как по данным биоэлектрической активности, так и по параметрам изменения содержания внутриклеточного кальция. При моделировании гипоксии in vivo превентивное применение N-ADA повышает резистентность мышей к гипоксии, улучшает восстановление мнестических функций после реоксигенации. Продемонстрированы рецептор-зависимые механизмы антигипоксического действия N-ADA. Оглавление.
Введение. Обзор литературы.
Эндогенная каннабиноидная система.
Лиганды каннабиноидных рецепторов. N- арахидоноилдофамин.
Биосинтез и деградация эндоканнабиноидов.
Каннабиноидные рецепторы и их локализация в головном мозге.
Прочие рецепторы, связывающие каннабиноиды.
Сигнальные пути, запускаемые эндоканнабиноидной системой.
Ретроградная модуляция синаптической передачи эндоканнабиноидами.
Нейропротекторное действие эндоканнабиноидов.
Роль эндоканнабиноидов в коррекции гипоксических и ишемических состояний мозга.
Изучение сетевой активности нейронов. Материалы и методы исследования.
Объект исследования.
Схема эксперимента.
Схема экспериментов in vitro.
Схема экспериментов in vivo.
Культивирование первичных диссоциированных клеток гиппокампа.
Методы оценки сетевой активности нейронов in vitro.
Биоэлектрическая спонтанная активность.
ультиэлектродные матрицы МЕD64 и MEA.
гистрация и анализ спонтанной сетевой биоэлектрической активности нейронов.
Функциональный кальциевый имиджинг.
Иммуноцитохимические методы.
Оценка жизнеспособности культивируемых клеток в диссоциированной культуре.
Моделирование нормобарической гипоксии in vitro.
Моделирование острой гипобарической гипоксии in vivo.
Методы оценки антигипоксического и нейропротекторного действия исследуемого соединения при моделировании острой гипобарической гипоксии in vivo.
Тест «открытое поле».
Тест «Водный лабиринт Морриса».
Статистическая обработка результатов. Результаты исследования и обсуждение.
Исследование антигипоксического и нейропротекторного действия N-арахидоноилдофамина при моделировании гипоксии in vitro.
Влияние N-арахидоноилдофамина на спонтанную биоэлектрическую активность культивируемых клеток гиппокампа при моделировании гипоксии.
Влияние N-арахидоноилдофамина на спонтанную кальциевую активность культивируемых клеток гиппокампа при моделировании гипоксии.
Влияние N-арахидоноилдофамина на выживаемость культивируемых клеток гиппокампа при моделировании гипоксии.
Влияние N-арахидоноилдофамина на распределение каннабиноидных рецепторов первого и второго типов в диссоциированных культурах гиппокампа при моделировании гипоксии.
Исследование антигипоксического и нейропротекторного действия N-арахидоноилдофамина при моделировании гипоксии in vivo.
Влияние N-арахидоноилдофамина на выживаемость животных при моделировании острой гипобарической гипоксии.
Влияние N-арахидоноилдофамина на показатели двигательной и ориентировочно-исследовательской активности мышей в тесте «Открытое поле».
Влияние N-арахидоноилдофамина на навигационное научение и долговременную память у мышей в тесте «Водный лабиринт Морриса». Заключение.
Выводы.
Список сокращений.
Список литературы.
Научная новизна. Впервые выявлены ранние и отдаленные эффекты, оказываемые N- ADA на индуцированные острой нормобарической гипоксией изменения спонтанной биоэлектрической активности нейронной сети в культуре клеток гиппокампа, проявляющиеся в поддержании сетевой биоэлектрической активности нейронов в период гипоксии, а также сохранении паттерна сетевой пачки импульсов в отдаленном постгипоксическом периоде.
Научно-практическая значимость. Полученные результаты расширяют имеющиеся фундаментальные знания о нейропротекторной роли N-ADA и выявляют его антигипоксические свойства. Показано, что превентивная аппликация N- ADA при моделировании острой гипоксии in vitro поддерживает функциональную активность нейронных сетей в культуре клеток гиппокампа мыши как по данным биоэлектрической активности, так и по параметрам изменения содержания внутриклеточного кальция. При моделировании гипоксии in vivo превентивное применение N-ADA повышает резистентность мышей к гипоксии, улучшает восстановление мнестических функций после реоксигенации. Продемонстрированы рецептор-зависимые механизмы антигипоксического действия N-ADA. Оглавление.
Введение. Обзор литературы.
Эндогенная каннабиноидная система.
Лиганды каннабиноидных рецепторов. N- арахидоноилдофамин.
Биосинтез и деградация эндоканнабиноидов.
Каннабиноидные рецепторы и их локализация в головном мозге.
Прочие рецепторы, связывающие каннабиноиды.
Сигнальные пути, запускаемые эндоканнабиноидной системой.
Ретроградная модуляция синаптической передачи эндоканнабиноидами.
Нейропротекторное действие эндоканнабиноидов.
Роль эндоканнабиноидов в коррекции гипоксических и ишемических состояний мозга.
Изучение сетевой активности нейронов. Материалы и методы исследования.
Объект исследования.
Схема эксперимента.
Схема экспериментов in vitro.
Схема экспериментов in vivo.
Культивирование первичных диссоциированных клеток гиппокампа.
Методы оценки сетевой активности нейронов in vitro.
Биоэлектрическая спонтанная активность.
ультиэлектродные матрицы МЕD64 и MEA.
гистрация и анализ спонтанной сетевой биоэлектрической активности нейронов.
Функциональный кальциевый имиджинг.
Иммуноцитохимические методы.
Оценка жизнеспособности культивируемых клеток в диссоциированной культуре.
Моделирование нормобарической гипоксии in vitro.
Моделирование острой гипобарической гипоксии in vivo.
Методы оценки антигипоксического и нейропротекторного действия исследуемого соединения при моделировании острой гипобарической гипоксии in vivo.
Тест «открытое поле».
Тест «Водный лабиринт Морриса».
Статистическая обработка результатов. Результаты исследования и обсуждение.
Исследование антигипоксического и нейропротекторного действия N-арахидоноилдофамина при моделировании гипоксии in vitro.
Влияние N-арахидоноилдофамина на спонтанную биоэлектрическую активность культивируемых клеток гиппокампа при моделировании гипоксии.
Влияние N-арахидоноилдофамина на спонтанную кальциевую активность культивируемых клеток гиппокампа при моделировании гипоксии.
Влияние N-арахидоноилдофамина на выживаемость культивируемых клеток гиппокампа при моделировании гипоксии.
Влияние N-арахидоноилдофамина на распределение каннабиноидных рецепторов первого и второго типов в диссоциированных культурах гиппокампа при моделировании гипоксии.
Исследование антигипоксического и нейропротекторного действия N-арахидоноилдофамина при моделировании гипоксии in vivo.
Влияние N-арахидоноилдофамина на выживаемость животных при моделировании острой гипобарической гипоксии.
Влияние N-арахидоноилдофамина на показатели двигательной и ориентировочно-исследовательской активности мышей в тесте «Открытое поле».
Влияние N-арахидоноилдофамина на навигационное научение и долговременную память у мышей в тесте «Водный лабиринт Морриса». Заключение.
Выводы.
Список сокращений.
Список литературы.