Катлинский А.В. Курс лекций по биотехнологии

149

утверждать, что в фрагменте х именно один из таких генов. Если, колония на

индикаторной среде с лактозой выросла бесцветная, значит на искусственной

питательной среде, данный промотор не работал и ген во фрагменте х не

экспрессировался. Вероятно, что он нужен только при развитии инфекционного

процесса и принадлежит к генам вирулентности. В случае же колоний красного

цвета экспрессируется ген, кодирующий образование фермента, расщепляющего

лактозу; при этом меняется цвет индикатора и колония окрашивается. Отсюда

можно сделать вывод о том, что в данном фрагменте х содержится (вместе с

промотором) ген, принадлежащий к house keeping gens, т.е. он экспрессируется

всегда: и в организме животного и на искусственной питательной среде. Такой

ген в данной случае не представляет интереса. Его можно обнаружить более

традиционным путем ( для подбора в последующем ингибиторов кодируемого

им продукта).

Авторы рассмотренного метода (метода IVET) приводят результаты

конкретной серии своих экспериментов, в соответствии с которой, на 212.000

колоний красного цвета пришлось только около 2600 колоний неокрашенных. Из

клеток E.coli, образовавших эти, последнего типа колонии, было затем выделено

около ста генов, принадлежащих к "скрытым" генам салмонеллы (ivi генам). Из

них около пятидесяти были новыми, т.е. ранее не описанными, и их продукты

представляли интерес как потенциальные таргеты для отбора антимикробных

агентов.

Метод IVET не является единственным путем идентификации ivi генов у

патогенных микроорганизмов. Разрабатываются и другие подходы, например, с

использованием направленного мутагенеза.

Интерес к ivi генам обусловлен не только тем, что они (их продукты)

практически не использованы как таргеты, но и тем, что здесь следует надеяться

на высокую избирательность действия (безопасность) создаваемых

лекарственных средств. В месте с тем необходимо отметить, что в настоящее

время геномика уже позволяет дифференцировать гены патогенных

микроорганизмов по многим показателям и это, в свою очередь, позволяет вести

скрининг антимикробных агентов все более целенаправленно. В качестве

примера можно привести результаты, полученные при изучении представителей

рода Chlamydia ( внутриклеточных паразитов с относительно небольшим

геномом - порядка одного миллиона пар нуклеотидов), которые вызывают

инфекции бронхолегочного и мочеполового трактов. Прежде всего гены этого

прокариота были разделены на house keeping gens и ivi гены. Далее, была

выявлена группа генов, влияющих на апоптоз клетки - хозяина. Далее, были

150

идентифицированы гены, дублирующие систему жизнеобеспечения паразита.

При этом было показано, что ряд этих генов близок по степени гомологии генам

высших растений и приблизительно 27 % из них уникальны для рода Chlamydia.

Классификации различных генов становятся все более многочисленными

и разнообразными, а, следовательно, и таргетный скрининг, начинающийся с

генов, в идеале должен вести к все более четким результатам, то есть

антимикробным агентам с четко определенными свойствами.