
Материалы пятой международной конференции
Наука и образование для целей биобезопасности
46
7- Bас.anthracis штамм Ч-7, патогенный
8- Brucella abortus штамм 19
9- Изолят Bac.anthracis №22, музейный (труп овцы, Татарстан, 1972 год)
10- L. monocytogenes шт. АУФ
11- Проба почвы из территории мясокомбината г.Зеленодольска
12- B.anthracis штамм 34F
2
13- Изолят У2 (почва, Ульяновск, 2004 год)
14- Изолят У1 (труп свиньи, Ульяновск, 2004 год)
15- Изолят Зел (говядина, Зеленодольск, Татарстан, 2004 год)
16- Изолят Bac.anthracis №36, музейный (труп овцы, Чувашия, 1971 год)
17- B.anthracis шт. 81, патогенный, производственный
Как видно из рисунка, при амплификации фрагментов ДНК, на матрице
Вас.аnthracis шт. Ч-7, 81, 71/12 синтезировались 3 специфичных фрагмента, что
свидетельствует об их
принадлежности к роду бациллус и виду имеющему в геноме две
плазмиды. В то же время у бескапсульных штаммов бацилл сибирской язвы (55, 34F
2
)
инициировался синтез 2 фрагментов, а с геномами гетерологичных видов и родов
праймеры не связывались и не инициировали синтез фрагментов ДНК. На матрице вновь
выделенных изолятов, а также у музейных штаммов синтезировались по 3 ампликона
различной молекулярной массы, которые совпадали по этому критерию с ампликонами
известных патогенных штаммов.
Из результатов этих опытов видно,
что праймеры выявляли локусы ДНК
микроорганизмов принадлежащие к роду бациллус, а наличие плазмиды рХО1 и рХО2
свидетельствовали о патогенности штаммов возбудителя сибиреязвенной инфекции, то
есть позволяли дифференцировать патогенные и вакцинные штаммы, а также изоляты.
Нижний ампликон является родоспецифичным, то есть этот локус содержится у
всех бацилл. Например, Bacillus cereus. Но у них отсутствуют
плазмиды и поэтому два
верхних ампликона у них отсутствуют. Патогенные штаммы Bac.anthracis, наоборот,
имеют обе плазмиды рХ01 и рХ02 и по этому на их матрице синтезируются еще два
ампликона, которые по молекулярной массе больше чем родовой ампликон.
В наших исследованиях были исследованы три изолята, выделенные в этом, 2004
году. Изолят «Зел» был
выделен из говядины в мясокомбинате города Зеленодольска
Республики Татарстан. Из территории мясокомбината были взяты также пробы почвы.
ПЦР – индикация этих проб показал, что изолят выделенный из мяса содержит
патогенный штамм Bac.anthracis. В пробах почвы возбудитель сибирской язвы не был
обнаружен (трек 11).
В этом же году, в одном из хозяйств Ульяновской области, были
выделены еще
два изолята: из трупа свиньи и почвы на ферме где пала свинья. Исследование этих проб
при помощи мультипраймерной ПЦР показали, что в них содержатся патогенные
штаммы Bac.anthracis, с полным набором плазмид (треки 13 и 14). Для проверки
достоверности ПЦР были параллельно исследованы известные патогенные изоляты
Bac.anthracis, выделенные на территории Татарстана и Чувашии
в 1972 и 1971 годах,
соответственно.
Далее, для выяснения происхождения этих штаммов-изолятов нами были
проведены исследования по генотипированию при помощи секвенса ампликонов из 8-ми
маркерных локусов: А, В1, В2, С1, С2, CG3, рХ01 и рХ02. Ниже приводятся
расшифрованные (секвенированные) нуклеотидные последовательности этих
олигонуклеотидов.
Нами были исследованы 6 изолятов возбудителя сибирской язвы: