Рис.
П.
10. «Непрямые» иммуноанализы.
1 — антиген; 2 — антитело к заданному антигену; 3 — антииммуноглобулино-
вые антитела, несущие метку
(конъюгат).
Главное преимущество непрямых им-
муноанализов состоит в том, что один и тот же препарат меченых
антиимму-
ноглобулиновых антител (конъюгат, хорошо проверенный, охарактеризованный
и стандартизованный) используют в анализах с самыми разными парами
конкретных антигенов и антител.
В качестве ферментов-меток в ИФА используют следующие фер-
менты и субстраты для них:
1) пероксидазу из корней хрена [субстраты: орто-фенилендиамин
(продукт желто-коричневый, растворимый, поглощает при 420
нм);
3,3'-диаминобензидин (продукт коричневый, нерастворимый); 3-
амино-9-этилкарбазол (продукт красный, нерастворимый); 5-амино-
салициловая кислота (продукт коричневый, растворимый, поглоща-
ет при 405 нм); 2,2'-азино-бис(3-этилбензтиазолин)-6-сульфоновая
кислота (продукт зеленый, растворимый, поглощает при 405 нм); 4-
хлоро-1-нафтол
(продукт голубой, нерастворим); 3,3'-диметокси-бен-
зидин (продукт желто-оранжевый, растворимый, поглощает при 405 нм);
3,3',5,5'-тетраметилбензидин (продукт голубой, растворимый, погло-
щает при 450 нм); ABTS — 2,2'-азино-ди(3-этилбензтиазолин)-
6-сульфоновая кислота]. Нерастворимые продукты ферментативных
реакций используют в методах иммуногистохимии и иммуноблоттин-
га,
растворимые — в иммуноферментных анализах, в которых ре-
зультат регистрируют количественно спектрофотометрически;
2)
β-галактозидазу
(субстраты — дериваты
/3-галактозида,
напри-
мер, 4-метилумбелиферил- β - D-галактозин);
3) щелочная фосфатаза [субстраты: 5-бромо-4-хлоро-3-индолил
фосфат в комбинации с голубым тетразолиевым (продукт голубой,
нерастворимый); р-нитрофенил фосфат (продукт желтый, раствори-
мый, поглощает при 405 нм)];
4) уреазу [субстрат — мочевина в комбинации с бромкрезолом
пурпурным (продукт образуется очень быстро, пурпурного цвета,
растворимый, поглощает при 590 нм)].
Встречаются оригинальные разработки с использованием других
ферментов-меток.
Чувствительность
иммуноанализов.
Термин «чувствительность» при-
менительно к
иммуноанализам
имеет два разных смысла. Во-первых,
как минимально определяемая данным анализом концентрация ис-
комого вещества в пробе. Как правило, для большинства ИФА тест-
систем чувствительность в этом понимании составляет нанограммы
в миллилитре. Второе понимание термина «чувствительность» попу-
383