Дурынина Е.П., Егоров В.С. Агрохимический анализ почв, растений, удобрений
Подождите немного. Документ загружается.
краской 2-6 дихлорфенолиндофенола до появления ясно-розовой
окраски, не исчезающей 1 мин. Каждую каплю краски размешивают
стеклянной палочкой. Если фильтрат окрашен, то титрование проводят
следующим образом: 5-10 мл фильтрата поместить в пробирку и
прибавить 2 мл дихлорэтана. Титруем в пробирке, слегка встряхивая,
до окрашивания капли дихлорэтана на дне пробирки.
8. Учитывая, что смесь соляной и метафосфорной кислоты
может также обладать восстановительными свойствами по отношению
к синей краске, вводят поправку в результат опытного титрования. Для
этого в контрольную колбу на 100 мл помещают 20 мл
1%-ной
НС1,
доливают до метки метафосфорной кислотой, перемешивают. Берут
две параллельные пробы раствора, равные по объему опытным,
помещают в чистые фарфоровые чашечки. Титруют контрольные
растворы синей краской из микробюретки. Полученный результат
(поправку) вычитают из данных титрования опытных растворов.
Примечание. Соляная кислота извлекает из растительных
тканей аскорбиновую кислоту и способствует инактивации ферментов.
Метафосфорная кислота используется для осаждения белков и
повышения устойчивости аскорбиновой кислоты в экстрактах. В связи
с этим, прн массовых анализах титрование можно отложить на 2 часа,
а при хранении в холодильнике даже на сутки.
4.23.2. Расчет
Содержание аскорбиновой кислоты выражают в мг витамина
на 100 г сырого веса ( мг % ):
r o/l
X-AVIOO
витамин С [мг
%]
= ,
а- Н
где:
X - поправочный коэффициент (показывает количество
аскорбиновой кислоты (мг), соответствующее 1 мл приготовленной
краски); А - мл краски, пошедшей на титрование: V - общий объем
растительного экстракта, мл; d - мл экстракта, взятые на титрование; //
- навеска, г.
4.23.3. Определение поправочного коэффициента X для краски.
Приготовить раствор краски точно указанной нормальность
невозможно, так как это соединение лабильное, поэтому используют
следующий прием.
Готовят раствор аскорбиновой кислоты слабой концентрации,
для этого 1.5 мг (несколько кристалликов) кислоты растворяют в
мерной колбе на 50 мл в 2 %-ной соляной кислоте и доводят до метки.
Берут две параллельные пробы приготовленного раствора по 10-15 мл
в фарфоровые чашечки, первую из них титруют раствором синей
краски, а вторую - раствором точно известной нормальности иодата
калия, но в эту чашечку перед титрованием добавляют 5-10 мг KJ на
кончике скальпеля и 5 капель 1 %-го растворимого крахмала.
Известно, что
1
мл точно 0.001 н. раствора краски соответствует 0.088
мг аскорбиновой кислоты, поэтому рассчитывают поправочный
коэффициент X.
0.088 а
Х
~ Ь '
где:
а - количество иодида калия 0.001 н. (мл), пошедшее на
титрование; Ъ - количество краски (мл), пошедшей на титрование
приготовленного раствора аскорбиновой кислоты.
4.23.4. Реактивы.
1.
0.001 и. раствор 2.6 дихлорфенолиидофеиол (синяя краска).
60 мг вещества количественно переносят в мерную колбу на 200 мл,
доливают приблизительно 150 мл дистиллированной теплой воды и 3-
4 капли 0.01 н. щелочи
NaOH,
растворяют краску, доводят раствор до
метки, перемешивают и фильтруют раствор через рыхлый фильтр.
Раствор сохраняется в холодильнике около недели. Краску перед
взятием навески не высушивать, при нагревании она теряет свои
свойства.
2.
0.001 и. раствор иодида калия
KJO3.
Берут точную навеску
0.2568г вещества, предварительно высушенного при температуре
102
е
С в течение двух часов. Растворяют в мерной колбе на I л,
доводят до метки. Этот стандартный раствор 001 н. разбавляют в 10
раз,
для этого 100 мл раствора при помощи пипетки помешают в
мерную колбу на 1 л, доводят до метки дистиллированной водой и
получают 0.001 н. раствор иодата калия.
3.
1
%-я соляная кислота: 22.6 мл коиц. НО в
1
л раствора.
4.2 % -я метафосфорная кислота.
5.
Аскорбиновая кислота кристаллическая.
6. Йодистый калий кристаллический.
7.
Крахмал воднорастворимый, I %-ный - раствор.
8. 0.01 н. раствор NaOH готовят из фиксанала.
4.24. Определение каротина по Сапожникову.
Растительные пигменты, окрашенные в желтый или
оранжевый цвет, нерастворимы в воде, но растворимы в органических
растворителях типа бензина, ацетона, петролейного эфира, составляют
группу каротиноидов. Наиболее известным представителем ее
является каротин-пигмент, придающий специфическую окраску
корням моркови, зернам кукурузы, наряду с хлорофиллом он
окрашивает зеленые части растений. Формула каротина - С
4
(№н-
Обычно растительные пигменты представляют собой смесь двух-трех
изомеров, характерной особенностью каротиноидов является наличие
в них значительного числа сопряженных двойных связей (около 15),
образующих их хромофорные группы, от которых завит окраска.
Предполагают, что каротиноиды, как переносчики активного
кислорода у растений, играют важную роль в процессах фотосинтеза,
дыхания, роста.
Их значение в питании человека и животных связано с тем,
что при ферментативном разложении одной молекулы каротина в
животном организме образуется две молекулы витамина А. Отсутствие
или недостаток витамина А приводит к нарушению роста, снижению
иммунитета к болезням, ослаблению зренкя, называемому куриной
слепотой. Наиболее важным источником витамина А в пище человека
являются листовые овощи (салат, шпинат, зеленый лук), морковь,
томаты, а также жиры из печени морских рыб (рыбий жир), для
животных - окрашенные корнеплоды и луговые травы.
Определение каротина необходимо для оценки качества
растительной продукции в зависимости от ряда агротехнических
факторов и приемов; в зоотехнике для составления рационов
кормления и в здравоохранении для разработки лечебного питания.
В основе всех методов определения каротина присутствует
метод хроматографического адсорбционного анализа, разработанный
русским ученым Цретом М.Е. Принцип метода состоит в том, что
сложная смесь различно окрашенных веществ экстрагируется из
листьев или корнеплодов каким-либо органическим растворителем
или их смесью, например, спирт, ацетон. Экстракт пропускает через
стеклянную трубку, заполненную адсорбентом. Как адсорбенты
используются тонко размолотые тальк, крахмал, углекислый кальций
или окись алюминия и др. В связи с тем, что каждый из пигментов
обладает различной скоростью движения по адсорбционной колонке с
фронтом растворителя и специфической адсорбционной
способностью; происходит концентрация данного пигмента в
определенном слое адсорбента. Слой адсорбента, содержащий тот или
иной пигмент, вынимают из трубки илн колонки. Пигмент выделяют
из адсорбента с помощью какого-либо другого растворителя и
количественно определяют, измеряя интенсивность окраски на
спектрофотометре или колориметре.
4.24.1.
Ход анализа.
1.
Проба свежих листьев или корнеплодов предварительно
измельчается скальпелем на кафельной плитке или пластмассовой
терке (приблизительно 20-30 г).
2.
Две параллельные навески по 1-5 г из пробы берутся на
часовом стекле на технических весах и помещаются в фарфоровую
ступку.
3.
В ступку добавляем 0.5 г соды (Wa
2
COj) для нейтрализации
органических кислот (поскольку в кислой среде каротин разрушается),
и безводный натрий сернокислый из расчета 3 г на 1 г сырой навески
для обезвоживания материала, перемешиваем массу скальпелем.
4.
В ступку добавляем 5 г адсорбента Alfii и 0.5 г кварцевого
песка, перемешиваем и тщательно пестиком растираем содержимое
ступки
до
образования сухой гомогенной массы, которую затем ставим
в темное место на 20 мин для полноты адсорбции пигментов.
5.
Готовим адсорбционную воронку. Для этого в нижнюю
часть стеклянной воронки закладываем ватный тампон средней
плотности, затем небольшими порциями насыпаем окись алюминия,
уплотняя его слегка стеклянной палочкой. Высота адсорбционного
слоя должна быть примерно 2.5 см.
6. Поверхность адсорбента, выровненную скальпелем, слегка
смачивают по всей воронке каплями дистиллированной воды
(примерно J 5 капель) и воронку вставляют в приемник, обычно
используют мерную колбу на 100 мл.
7.
Гомогенную массу из ступкн количественно с помощью
скальпеля переносят на поверхность адсорбционной воронки,
распределяя равномерно.
8. В ступку наливают 20 мл бензина, тщательно споласкивают
пестик и стенки ступки, вычищая остатки адсорбента скальпелем,
содержимое выливают в воронку, операцию повторяют до тех пор,
пока в ступке не останется следов пигментов.
9. Бензин медленно приливают из стакана на воронку, вся
поверхность навески должна быть покрыта тонким слоем бензина, так
как иа воздухе каротин может окисляться.
10.
Экстракцию каротина проводят до тех пор, пока желтые
пигменты на ватном тампоне не перейдут в раствор приемника
каротина, а капли бензина, поступающие в приемник не будут
бесцветными.
11.
Содержимое колб после экстракции довести до метки
чистым бензином и колориметрировать. Можно измерить цилиндром
объем полученного раствора каротина, записать в журнал и
колориметрировать с синим светофильтром (длина волны 420 нм),
кюветы 0.5 см. В контрольную кювету налить бензин.
4.24.2. Расчет
r o/i
AV100
Содержание каротина [мг
%]
= — ,
Н
где:
А - мг каротина по графику; У- объем полученного экстракта, мл;
Я-
навеска растительного материала, г.
4.24.3. Форма записи.
вариант
образец
навеска,
г
экстракт
мл
показания
ФЭК
каротин по
графику, мг
каротин,
мг%
4.24.4. Реактивы.
1.
Окись алюминия (Al
2
0
3
), высушенная при 105° С в
сушильном шкафу, увлаженная затем до 4 % влаги, сохраняется в
склянке с притертой пробкой.
2.
Натрий сернокислый безводный, Na^Oj, порошок ;
3.
Сода, NajCO), порошок.
4.
Бензин, очищенный на активированном угле.
5.
Основной стандартный раствор двухромовокнелогого калия
KjCr^Oj для построения графика на каротин (720 мг KjCr
2
0
7
х.ч.
растворяют в литре дистиллированной воды, 1 мл этого раствора
соответствует 0.00416 мг каротина. Разведения готовят в колбах на
100 мл, доводя раствор до метки водой. Исходный раствор
двухромового калия долго сохраняется в темноте.
Работу по извлечению каротина проводят под тягой, при этом
недопустима работа любых нагревательных приборов в помещении и
курение!
Таблицы Бертрана
для
расчета растворимых углеводов
Меди
1.1
1.2
1.3
1.4
1.5
1.6
1.7
1.8
1.9
2.0
2.1
2.2
2.3
2.4
2.5
2.6
2.7
2.8
2.9
3.0
3.1
3.2
3.3
3.4
3.5
3.6
3.7
3.8
3.9
4.0
4.1
4.2
4.3
4.4
4.5
(ре
Глю-
козы
0.50
0.54
0.59
0.63
0.68
0.72
0.77
0.81
0.83
0.90
0.95
1.00
1.04
1.09
1.13"
1.18
1.22
1.27
1.31
1.36
1.40
1.45
1.50
1.54
1.59
1.63
1.68
1.72
1.77
1.81
1.83
1.90
1.95
2.00
2.04
дуцирующии сахар
в
милиг
Меди
4.6
4.7
4.8
4.9
5.0
5.1
5.2
5.3
5.4
5.5
5.6
5.7
5.8
5.9
6.0
6.1
6.2
6.3
6.4
6.5
6.6
6.7
6.8
6.9
7.0
7.1
7.2
7.3
7.4
7.5
7.6
7.7
7.8
7.9
8.0
Глю-
козы
2.09
2.13
2.18
2.22
2.27
2.31
2.36
2.40
2.45
2.50
2.55
2.60
2.65
2.70
2.75
2.80
2.85
2.90
2.95
3.00
3.05
3.10
3.15
3.20
3.25
3.30
3.35
3.40
3.45
3.50
3.55
3.60
3.65
3.70
3.75
Меди
8.1
8.2
8.3
8.4
8.5
8.6
8.7
8.8
8.9
9.0
9.1
9.2
9.3
9.4
9.5
9.6
9.7
9.8
9.9
10.0
10.1
10.2
10.3
10.4
10.5
10.6
10.7
10.8
10.9
11.0
11.1
11.2
11.3
11.4
11.5
гаммах)
Глю-
козы
3.80
3.85
3.90
3.95
4.00
4.05
4.10
4.15
4.20
4.25
4.30
4.35
4.40
4.45
4.50
4.55
4.60
4.65
4.70
4.75
4.80
4.85
4.90
4.95
5.00
5.05
5.10
5.15
5.20
5..2S
5.30
5.35
5.40
5.45
5.50
Меди
11.6
11.7
11.8
11.9
12.0
12.1
12.2
12.3
12.4
12.5
12.6
12.7
12.8
12.9
13.0
13.1
13.2
13.3
13.4
13.5
13.6
13.7
13.8
13.9
14.0
14.1
14.2
14.3
14.4
14.5
14.6
14.7
14.8
14.9
15.0
Глю-
козы
5.55
5.60
5..65
5.70
5.75
5.80
5.85
5.90
5.95
6.00
6.05
6.10
6.15
6.20
6.25
6.30
6.35
6.40
6.45
6.50
6.55
6.60
6.65
6.70
6.75
6.80
6.85
6.90
6.95
7.00
7.05
7.10
7.15
7.20
7.25
Продолжение.
Меди
15.1
15.2
15.3
15.4
15.5
15.6
15.7
15.8
15.9
16.0
16.1
16.2
16.3
16.4
16.5
16.6
16.7
16.8
16.9
17.0
17.1
17.2
17.3
17.4
17.5
17.6
17.7
17.8
17.9
18.0
18.1
18.2
18.3
18.4
18.5
Глю-
козы
7.30
7.35
7.40
7.45
7.50
7.55
7.60
7.65
7.70
7.75
7.80
7.85
7.90
7.95
8.00
8.05
8.10
8.15
8.20
8.25
8.30
8.35
8.40
8.45
8.50
8.55
8.60
8.65
8.70
8.75
8.80
8.85
8.90
8.95
9.00
Меди
18.6
18.7
18.8
18.9
19.0
19.1
19.2
19.3
19.4
19.5
19.6
19.7
19.8
19.9
20.0
20.1
20.2
20.3
20.4
20.5
20.6
20.7
20.8
20.9
21.0
21.1
21.2
21.3
21.4
21.5
21.6
21.7
21.8
21.9
22.0
Глю-
козы
9.05
9.10
9.15
9.20
9.25
9.30
9.35
9.40
9.45
9.50
9.55
9.60
9.65
9.70
9.75
9.80
9.85
9.90
9.95
10.00
10.05 *
10.10
10.15
10.20
10.25
10.30
10.35
10.40
10.45
10.50
10.55
10.60
10.65
10.70
10.75
Меди
22.1
22.2
22.3
22.4
22.5
22.6
22.7
22.8
22.9
23.0
23.1
23.2
23.3
23.4
23.5
23.6
23.7
23.8
23.9
24.0
24.1
24.2
24.3
24.4
24.5
24.6
24.7
24.8
24.9
25.0
25.1
25.2
25.3
25.4
25.5
Глю-
козы
10.80
10.85
10.90
10.95
11.00
11.05
11.10
11.15
11.20
11.25
11.30
11.35
11.40
11.45
11.50
11.55
11.68
11.73
11.78
11.84
11.89
11.94
12.00
12.05
12.10
12.15
12.20
12.25
12.30
12.35
12.40
12.45
12.50
12.55
12.60
Меди
25.6
25.7
25.8
25.9
26.0
26.1
26.2
26.3
26.4
26.5
26.6
26.7
26.8
26.9
27.0
- 27.1
27.2
27.3
27.4
27.5
27.6
27.7
27.8
27.9
28.0
28.1
28.2
28.3
28.4
28.5
28.6
28.7
28.8
28.9
29.0
Глю-
козы
12.65
12.70
12.75
12.80
12.85
12.90
12.95
13.00
13.05
13.10
13.15
13.20
13.25
13.30
13.35
13.40
13.45
13.50
13.55
13.60
13.65
13.70
13.75
13.80
13.85
13.90
13.95
14.00
14.05
14.10
14.15
14.21
14.26
14.31
14.36
Продолжение
Меди
29.1
29 2
29.3
29.4
29.5
29.6
29.7
29.8
29.9
30.0
30.1
30.2
30.3
30.4
30.5
30.6
30.7
30.8
30.9
31.0
31.1
Глю-
козы
14.42
14.47
14 52
14.57
14.63
14.68
14.73
14.78
14.84
14.89
14
94
15.00
15.05
15.10
15.15
15.20
15.25
15 30
15.35
15 40
15.45
Меди
31.2
31.3
31.4
31.5
316
31.7
31.8
31.9
32.0
32.1
32.2
32.3
32.4
32.5
32.6
32.7
32.8
32.9
33.0
33.1
33.2
Глю-
козы
15.50
15.55
15.60
15 65
15.70
15.75
15.80
15.85
15.90
15.95
16.00
16.05
16.10
16.15
16.20
16.25
16.30
16.35
16.40
16.45
16.50
Меди
33.3
33.4
33.5
33.6
33.7
33.8
33 9
34.0
34.1
34.2
34.3
34 4
34.5
34.6
34.7
34.8
34.9
35.0
35.1
35.2
35.3
Глю-
козы
16.55
16.60
16.65
16.70
16.75
16.80
16.85
16.90
16.95
17.00
17.05
17.10
17.15
17.20
17.25
17 30
17.35
17.40
17.45
17.50
17.55
Меди
35.4
35.5
35.6
35.7
35.8
35.9
36.0
36.1
36.2
36.3
36.4
36.5
36.6
36.7
36.8
36.9
37 0
37.1
37.2
37.3
37.4
Глю-
j
козы
17.60
17.65
17.70
17.75
17.80
17.85
17.90
17.95
18.00
18.05
18.10
18.15
18.21
18.26
18.31
18.36
18.42
18.47
18.52
18.57
18.63
I
i
i
X
Ф
§
2
s
a
с
к
о
I
a
x
л
I
X
O
S
Ш
T
s
2
re
s
z
а
a
s
о
s
n
a,
I
!
i
s
2?
t-
33
N
gs
a
2
N
N
>s
t
1 1
s а
0
С
>s
ельны
вес
I**
1
>
._
цное
ство
8
1
ё
2
о
1_
X
У
ё
р
2
о
1
0
S
S
ш
а>
ЗГ
$
га
m
&
да
ш
<°.
Я
"3
$
(О
л"
со
см
(0
Я?
•*
(0
«0
со
0)
О
X
(0
ю*
«г
Л
0>
(0
О
<0
0)
0)*
t—
I*.
Т"
(0
0)
2
X
00
о'
о
ti
о
со'
«о
о
(0
со*
N
О
(0
(О
(0
§
*"
о"
*г
X
ю
0)
см
0)
со*
т*
&
яг
т-
со
N.*
СМ
«о
0)
0>
о.
X
8
и
£
о
Го
«о*
см
СО
«О
СМ
Ч
9
о.
со
о
о*
о
о
о
см
0)
о"
X
Q
X
Z
i
I
ю
о
1С
p.
«2
S
if
8-8
К
X
с
«
в*
u
I
a
2
i
r»
O
-
X
IA
I
n
5*
X
2
I
ж
о
s
о
I
Q>
T
s
i
i!
.a
8
ж
з
3i
Si
£
F
8
§3
$5
Ife"
s
о
>x
a»
3
Ш
с
.
i
IS
S
§
I
Sow
|
I
Щ
§w
II
?
1!
05
i
05
4,
I
Й
ю
Я?
ев
ш