Эйхгорн Г. (ред.) Неорганическая биохимия. Том 1

Подождите немного. Документ загружается.

Металлоферменты 483

данных для комплексов Mn

+ — диоксиацетонфосфат и фермент —

+ — диоксиацетонфосфат указывает на разницу в их структу-

рах, которая соответствует связыванию карбонила субстрата [292]

в присутствии фермента в соответствии с предложенным механиз-

мом (рис. 14.6). Однако следует с осторожностью относиться к

экстраполяции этих данных на механизм действия природного

2п

+-содержащего фермента, поскольку замена Zn

+ на Mn

+ на

порядок понижает каталитическую активность фермента [291].

Описаны также и другие альдолазы, относящиеся к классу II.

Некоторые из этих ферментов являются аналогами ФДФ-альдола-

зы из дрожжей, так как они нуждаются в добавлении ионов ме-

талла только после продолжительного диализа против ЭДТА.

Примерами могут служить фукулозо-1-фосфатальдолаза [292а] и

рамнулозо-1-фосфатальдолаза [293]. Природный ион металла,

присутствующий в этих ферментах, до сих пор не определен. Одна-

ко некоторые другие альдолазы класса II, которые образуют менее

устойчивые двойные комплексы E—M

+, как, например, в случае

ФДФ-альдолазы из С. perfringens, выделены в виде апоферментов.

К ним относятся также 2-кето-З-дезоксиглутаратальдолаза [293а]

и кетопантоатальдолаза [294]. Этим ферментом необходима акти-

вация добавлением M

+, и, хотя обычно принято считать, что к ним

применим механизм, изображенный на рис. 14.6 [289а], в настоя-

щее время нет доказательств правильности такого допущения.

Кроме того, некоторые альдолазы, например 2-кето-4-окси-4-метил-

глутаратальдолаза [294а], были классифицированы как ферменты

класса II [289а] лишь на основании того, что ингибирование в

присутствии ЭДТА уменьшается при добавлении M

+. Однако этот

критерий неоднозначно демонстрирует роль M

+ в катализе, так

как ослабление ингибирования может протекать в первую очередь

благодаря удалению ЭДТА в виде комплекса с металлом, а не в

результате восстановления активности при комплексообразовании

+ с апоферментом.

Несколько лиаз кетокислот, близкородственные альдолазам,

также требуют активации добавлением M

+, например изоцитрат-

лиаза [295], р-окси-р-метилглутарил-КоА-лиаза [296] и цитрат-

лиаза [297]. Было высказано предположение, что в катализе лиа-

зами кетокислот [295] участвуют мостиковые комплексы фер-

мент— M

+ — субстрат, однако имеется мало данных, подтвержда-

ющих это предположение. Было показано образование кинетически

важного комплекса Mn

+ — цитратлиаза, в котором Mn

+ повыша-

ет СРП. Однако не наблюдалось снижение этого эффекта ни при

добавлении субстрата (цитрата), ни при добавлении продуктов

этой реакции (оксалоацетата, ацетата) [298]. Эти данные, однако,

недостаточны, чтобы исключить образование комплекса с метал-

лом в качестве мостика. Сходные результаты были получены при

СРП-исследованиях Мп

+-ФДФ-альдолазы из дрожжей, однако в

30*

484

Г лава 10

этом случае последующее изучение влияния этого фермента Hi

скорости релаксации протонов дало однозначные доказательств;

существования комплекса фермент — Mn

+ — субстрат [83, 292].

Цитратлиаза из Escherichia coli и Aerobacter aerugen.es [299]

подвергается необычной инактивации в результате собственной ре-

акции («самоубийство»), которая может вызываться взаимодейст-

вием фермента с енолоксалоацетатом в присутствии M

+ [300]

Специфичность активации под действием M

+ для этой реакции

отличается от специфичности, наблюдаемой для реакции расщеп-

ления [300, 301]. Причины такого «самоубийства» до сих пор не

объяснены; важно, однако, отметить, что этот эффект не является

результатом образования стабильного комплекса фермент — M

+—

енолоксалоацетат [302].

10. ГИДРОЛИАЗЫ И АММОНИЙЛ ИАЗЫ*

Поскольку эти ферменты, по-видимому, не имеют единого меха-

низма действия (однако см. Милдвана [8]), каждый класс будет

рассмотрен отдельно.

10.1. Гидролиазы

10.1.1. Енолаза

Изучение начальных скоростей при активации енолазы из

дрожжей ионами двухвалентных металлов [303, 304] дало осно-

вания для предположения, что мостиковый комплекс фермент —

+ — субстрат участвует в реакции, катализируемой этим фер-

ментом [3].

3-фосфоглицерат < > фосфоенолпируват + H

O (28а)

Изучение магнитного резонанса дало еще одно подтверждение об-

разования такого мостикового комплекса. Енолаза взаимодейству-

ет с Mn

+ с образованием двойного комплекса, который усиливает

СРП воды (еь=13,8). Этот эффект ослабляется при добавлении

субстратов [9, 21]. Как этот эффект, так и ингибирование под дей-

ствием Ca

+ [305] согласуются с участием в реакции комплекса

с мостиковым металлом (разд. 2.3 и 2.4). Было выдвинуто несколь-

ко умозрительных механизмов, основанных на участии этого комп-

лекса в механизме катализа [8]. Однако эта интерпретация кине-

тических данных и данных ядерного магнитного резонанса пред-

* Лиазы — это ферменты, которые катализируют негидролитическое расщеп-

ление связей углерод — азот, углерод — кислород и углерод — углерод.

Металлоферменты.

485

ставляется не очень надежной в свете последних данных,

полученных при исследовании прямого связывания M

+ и дальней-

шего изучения начальных скоростей [306]. Последние данные бо-

лее согласуются с участием в реакции комплекса с мостиковым

ферментом (разд. 1.4). Эти эксперименты показывают, что енолаза

из дрожжей имеет много центров связывания M

+. В отсутствие

субстрата найдены два центра связывания Mg

+ или Mn

+, отли-

чающихся на порядок по сродству к металлу. Однако в этих же

условиях появляется до шести центров взаимодействия с Ca

В результате возникает сомнение, можно ли интерпретировать сам

факт ингибирования под действием Ca

+ как доказательство уча-

стия в реакции комплекса с мостиковым металлом.

В присутствии субстрата появляются два дополнительных цент-

ра связывания Mg

+ (или Mn

+) с гораздо меньшим сродством к

этим металлам. В то же время присутствие субстрата в 3—4 раза

повышает сродство того из двух прежде существовавших центров,

который проявлял меньшее сродство к этим ионам в отсутствие

субстрата. Найденное для Mn

+ Kd этого последнего центра хоро-

шо согласуется с определенным в результате СРП-исследований

[9, 21]. Однако необъяснимым остается то, что при этих исследо-

ваниях не удалось обнаружить второго более прочного места свя-

зывания Mn

+, особенно учитывая, что более прочный центр связы-

вания Mg

+ наблюдался при изучении изменений ультрафиолето-

вых спектров и спектров флуоресценции енолазы, вызываемых

этим ионом металла [308]. Различие в предположениях о роли

ионов двухвалентных металлов в реакциях енолазы является пря-

мым результатом противоречий в имеющихся экспериментальных

данных. Эти противоречия должны быть разрешены до того, как

будут сделаны какие-либо заключения о механизме этих реакций.

10.1.1. Аконитаза

Поскольку в случае аконитазы несомненно требуется активация

ионами Fe

+ и цистеином [309, 310], неоднократно предполагалось,

что существование мостикового комплекса фермент — Fe

+ — суб-

страт является особенностью механизма катализа этого фермента

[310—313], катализирующего реакцию

±н

о ±н

цитрат < "> цис-аконитат ' изоцитрат (286)

Для этой реакции был предложен элегантный механизм «железно-

го колеса», который является наиболее современным из всех пред-

ложенных механизмов. Он основан на кристаллографических ис-

следованиях конформаций цитрата и изоцитрата и исходит из до-

пущения, что цис-аконитат может существовать в конформациях,

отвечающих соответственно цитрату или изоцитрату [313]. Меха-

486

Г лава 10

низм «железного келеса» позволяет удовлетворительно объяснит!

ряд необычных свойств реакции аконитазы, таких, как стереохимш

внутримолекулярного переноса протонов [314, 315], обязательны!

обмен гидроксильной группы субстрата с растворителем [315]

специфичность ингибирования и инактивация различными изоме

рами фторцитрата [316—318].

Хотя Mn

+ и не активирует аконитазу [310], этот ион металла

снижает скорость и степень активации ионами Fe

+, что позволяет

предположить конкуренцию этих двух металлов за один и тот же

центр (или центры) связывания [319]. Доказательства существо-

вания мостиковых комплексов фермент — M

+ — субстрат, предпо-

лагаемых как в механизме «железного колеса», так и в других

предложенных механизмах [310—313], были получены изучением

влияния комплекса Mn

+— аконитаза на СРП в присутствии и в

отсутствие субстратов, а также изучением его влияния на скорости

релаксации метиленовых протонов цитрата. Эти исследования

[319] показали, что 1) образуется комплекс фермент — Mn

+ —

цитрат, свойства которого соответствуют его участию в катализе;

2) Fe

+ может заменять Mn

+ в этом мостиковом комплексе;

3) цитрат и изоцитрат конкурируют за один и тот же центр (или

центры) на ферменте. Это сродство цитрата и изоцитрата к Mn

аконитазе близко к константам Михаэлиса взаимодействия этих

субстратов с природным Ре

+-ферментом. Однако цис-аконитат

взаимодействует с Мп

+-ферментом в гораздо меньшей степени.

Это последнее обстоятельство может, в частности, объяснить низ-

кую каталитическую активность Мп

+-аконитазы [319]. Хотя эти

данные и согласуются с механизмом «железного колеса», нужны

более определенные доказательства структуры мостиковых комп-

лексов фермент—-M

+ — цитрат и фермент — M

+ — изоцитрат.

Также интересно определить причины строгой специфичности ако-

нитазы к активации ионами M

+. По-видимому, Fe

+ является

единственным ионом металла, способным активировать этот фер-

мент [310, 319].

-Цитромалатгидролаза и (+)-тартратдегидраза, которые ка-

тализируют аналогичные реакции, также нуждаются в активации

+ и тиолом, например меркаптоэтанолом [320, 320а]. Однако

для реакции, катализируемой цитромалатгидролазой, необходимы

еще два белковых компонента [320].

10.1.3. Другие гидролиазы

Для некоторых других гидролиаз (дегидратаз) также необхо-

дима активация ионами M

+; примерами могут служить альтронат-

дегидратаза [321],дегидратаза диоксикислот [322], 6-фосфоглюко-

натдегидратаза [323], имидазолглицерофосфатдегидратаза [324]

и, по предварительным данным, б-аминолевулинатдегидратаза из

Металлоферменты.

487

Ustilago sphaerogena, возможно являющаяся медьсодержащим

металлоферментом [325] (однако см. Уилсон и др. [326]). Мало

что известно о роли ионов металла в реакциях, катализируемых

этими ферментами. Однако многие другие гидролиазы не являют-

ся металлоферментами, например дегидратазы аминокислот, ко-

торым в качестве кофактора необходим пиридоксальфосфат [327],

а также такие ферменты, как фумараза и кротоназа, которые не

нуждаются в кофакторе [328, 329].

10.2. Аммонийлиазы

Несколько аммонийлиаз, катализирующих реакцию (29), клас-

сифицированы как металлоферменты:

а+

R—CH

—CH(NH

)—COOH т—^ R-CH=CH -COOH + NH

(29)

Имеются две наиболее изученные металлзависимые аммонийлиазы:

p-метиласпартаза и гистидиндезаминаза. Для обоих ферментов

имеются доказательства участия в реакциях мостиковых комплек-

сов типа фермент — M

+ — субстрат [7, 330, 331], причем было

выдвинуто предположение, что электрофильный характер иона

двухвалентного металла облегчает депротонирование субстрата

[8, 330]. Однако имеются некоторые различия между р-метилас-

партазой и гистидиндезаминазой. Во-первых, p-метиласпартаза не-

активна в отсутствие M

+ [332—334], в то время как скорость ка-

тализа гистидиндезаминазой при добавлении M

+ повышается

только на 30—40% [335]. Возможно, что остаточная каталитиче-

ская активность, наблюдаемая в отсутствие M

+, объясняется на-

личием связанного иона металла, поскольку ЭДТА в этом случае

является сильнодействующим ингибитором каталитической актив-

ности. Кроме того, степень активации при добавлении M

+ варь-

ирует в зависимости от условий реакции и от методов выделения

фермента [335].

Во-вторых, p-метиласпартаза катализирует М

+-зависимый об-

мен протонов при p-углероде субстрата. Такой обмен позволяет

предположить промежуточное образование карбаниона, который

может быть стабилизирован ионом двухвалентного металла [336].

Отщепление аммиака от этого промежуточного продукта является

скоростьлимитирующей стадией реакции р-метиласпартазы [330,

336]. Наоборот, гистидиндезаминаза не катализирует обмен про-

тонов на p-углероде субстрата ни в присутствии, ни в отсутствие

+, а дезактивируется инкубацией с боргидридом, что указывает

на наличие «электрофильного центра», участвующего в дезамини-

ровании [335, 337]. В реакции гистидиндезаминазы стадией, лими-

тирующей скорость, является диссоциация комплекса фермент-

аммоний [338].

488

Г лава 10

Фенилаланиндезаминаза напоминает в некоторых аспектах гис-

тидиндезаминазу, например природой реакции, которую она ката-

лизирует, наличием «электрофильного центра» и отсутствием ката-

лиза реакции (3-протонного обмена. Однако этот фермент обладает

полной активностью и в отсутствие M

при всех до сих пор изу-

ченных условиях [339, 340] , причем нет доказательств присутствия

связанного металла в ферменте, хотя такая возможность и не иск-

лючена. Эти исследования фенилаланиндезаминазы надо иметь в

виду, когда делается предположение о включении M

+ в реакцию

гистидиндезаминазы, поскольку в соответствии с последними дан-

ными [340а] возникают сомнения в участии M

+ в этой реакции, а

также в интерпретации эффекта ингибирования ЭДТА [335].

11. ГИДРОЛАЗЫ

Две большие группы гидролаз (пептидазы и фосфатазы) обсуж-

даются в гл. 15 и 18 соответственно. Эти две группы включают не-

которые хорошо изученные металлоферменты, например карбокси-

пептидазы и щелочную фосфатазу. Описан и ряд других металло-

гидролаз.

11.1. Гидролазы, требующие или содержащие Ca

Ряд гидролаз либо содержит связанный Ca

+, как, например,

<х-амилазы [341—343], либо требует активации этим ионом метал-

ла, например нуклеаза стафилококка [85], некоторые фосфолипа-

зы [345, 346], -у-лактоназа [347]. Хотя амилазы дезактивируются

при удалении связанного металла [341], роль Ca

+ в этих фер-

ментах (возможно, за исключением нуклеазы стафилококка [85,

86]) является скорее структурной, чем каталитической [8, 341],

поскольку соотношение Ca

+: фермент широко меняется в а-ами-

лазах, выделенных из разных источников [347]. Прямым доказа-

тельством структурной (матричной) роли Ca

+ является потреб-

ность в этом ионе на некоторых стадиях действия така-амилазы

[341а], в результате чего каталитическая активность восстанавли-

вается. Однако ни эти данные, ни теоретические расчеты, основан-

ные на скорости обмена лигандов [76, 84], не достаточны, чтобы

исключить непосредственное участие Ca+

в катализе этими гид-

ролазами. В этом отношении будет уместно заметить, что физиоло-

гическими субстратами многих из этих ферментов являются макро-

молекулы и в ходе реакции могут образовываться мостиковые ком-

плексы; таким образом, могут наблюдаться отличия от действия

этих металлоферментов на небольшие молекулы субстратов [4].

Например, в образовании мостикового комплекса между гидрола-

зой и ее макромолекулярным субстратом могут участвовать не

один, а несколько ионов металла.

Металлоферменты.

489

11.2. Аргиназа

На основе исследований по активации аргиназы под действием

+ можно было сделать вывод об образовании комплекса с мо-

стиковым металлом [18] (ср. разд. 1.3). После этого аргиназе, а

также родственным ей металлактивируемым пептидазам (гл. 15)

уделялось довольно мало внимания. Недавно было показано, что

аргиназа из дрожжей активируется ионами металла только после

обработки хелатирующими агентами [349]. Однако попытки иден-

тифицировать природный ион металла в этом ферменте путем срав-

нения его свойств со свойствами рекомбинированных металлоарги-

наз дали неоднозначные результаты [350]. Ни одно из этих иссле-

дований не дает возможности разобраться в механизме активации

аргиназ M

12. СИНТЕТАЗЫ

Все синтетазы можно разделить на два класса на основе места

расщепления молекулы НТФ, которое происходит в ходе реакции

[351].

12.1 Синтетазы, катализирующие отщепление

пирофосфата

Эти ферменты, например ацил-КоА-синтетаза жиров, амино-

ацилпереносящие РНК-синтетазы, катализируют реакции, в кото-

рых активация карбоксильной группы сопровождается расщепле-

нием НТФ до НМФ+Р2О7 [351]. Во многих из этих реакций мо-

гут промежуточно образовываться ациладенилаты, связанные с

ферментом [352—354]. Для всех до сих пор изученных синтетаз

этого типа показана необходимость M

+ для их активации. Однако

только в немногих случаях исследована роль иона металла в ката-

лизе.

12.1.1. Ацетилкофермент А-синтетаза

Необходимость добавления ионов металлов для различных ре-

акций, катализируемых ацетил-КоА-синтетазой, дала основание

для предположения о механизме действия этого фермента

(рис. 14.7), который предусматривает наличие центров взаимодей-

ствия с тремя ионами металлов, необходимых для работы этого

фермента [48]. Участие M

+ наблюдали только для стадии (а)

(рис. 14.7), и тут могут быть использованы такие ионы, как Mg

+, Ca

+ и Fe

+, в концентрациях, превышающих 1 ммоль [47].

490 Г лава

Такая же специфичность наблюдается при активации аналогичной

реакции, катализируемой бутирил-КоА-синтетазой [357]. Тот факт,

что реакция активируется Ca

+, позволяет предположить участие

в стадии (а) мостикового комплекса фермент — АТФ—M

+ и так-

же может объяснить специфическую потребность этой реакции в

E + ацетат + АТФ

E + ацетип-АМФ

,2+

Mf, MJ ,M

(в)

м;

(о)

- E (ацетил-АМФ)

O*"

(6)

„ KoASH

ЧГ, M

ацетил-КоА+АМФ

Рис. 14.7. Предложенный механизм реакции ацетил-КоА-синтетазы, отражающий

стадии активации фермента одновалентными и двухвалентными катионами [359].

KoASH — кофермент А (—SH-форма); ацетил-КоА — кофермент А (—БСОСНз-форма).

добавлении Mf

[21]. После обработки фермента и реагентов хе-

латирующими смолами для катализа, как всей реакции в целом

[47], так и ее отдельных стадий [48], необходимо уже добавление

в стехиометрическом соотношении к ферменту второго иона двух-

валентного металла (Ми"), которым может быть Fe

+, Cd

+, Cu

или Ni

+ (рис. 14.7). Комплекс фермент — MII

медленно диссоци-

ирует и содержит 2 г-атома Mn

на 1 моль фермента [48]. Однако

недавно была выделена ацетил-КоА-синтетаза, которой после обра-

ботки хелатирующими агентами не нужен Mn". Исследование син-

тетазы, обработанной таким образом, не дает оснований думать о

присутствии в ней связанного металла [350]. Следовательно, аце-

тил-КоА-синтетаза может существовать в двух формах, только од-

ной из которых необходим Mn

. Не было сообщений о том, что

другим ацил-КоА-синтетазам жиров также необходима аналогич-

ная активация вторым ионом двухвалентного металла.

Кроме того, в случае ацетил-КоА-синтетазы для активации, как

реакции в целом, так и стадий (а) и (б) (рис. 14.7), необходимы

одновалентные катионы [359]. Однако связывание ацетиладенила-

та ферментом [стадия (в), рис. 14.7] протекает и в отсутствие

ионов одновалентных металлов. Многие аминоацил-тРНК-синтета-

зы также требуют одновалентных катионов для своей активации

[360].

Металлоферменты.

491

12.1.2. Аминоацил-тРHК-синтетазы

Эти ферменты катализируют реакции, аналогичные изображен-

ным на рис. 14.7 для ацетил-КоА-синтетазы.

E + аминокислота + АТФ < > E (аминоацил-АМФ) -f P

O^" (31)

E (аминоацил-АМФ) + тРНК <—E + АМФ + аминоадил-тРНК (32)

Во всех случаях для реакции (31) необходим M

+ [361—363], од-

нако специфичность активации варьирует для различных синтетаз.

В большинстве случаев наблюдается активация под действием

+ и Mn

+ [360]. Однако Ca

+ также активирует некоторые из

этих ферментов, например тирозил-тРНК-синтетазу [364], пролил-

тРНК-синтетазу [365], а другие — ингибирует, например глицил-

тРНК-синтетазу [366]. Последние исследования изолейцил-тРНК-

синтетазы показали, что в реакции участвуют комплексы

[МАТФ]

и [MP

O7~]. Однако необходимы дальнейшие исследо-

вания, которые пролили бы свет на разную специфичность актива-

ции различными M

+, а также на возможное отражение этих раз-

личий в механизме реакции.

Хотя для каталитического действия некоторых аминоацил-

тРНК-синтетаз в реакции (32) [367, 368] необходимы ионы M

эта необходимость проявляется только после диализа тРНК против

ЭДТА [367] и не является общей чертой, характерной для всех

ферментов этого типа [353, 363]. В данном случае потребность в

+ может явиться результатом обратимой денатурации некоторых

тРНК, протекающей при удалении связанного M

+ диализом про-

тив ЭДТА [3686], хотя нельзя исключить и возможности непосред-

ственного участия M

+ в реакции (32), если учесть некоторые дру-

гие данные [368а]. В тех случаях, когда было непосредственно

показано, что для протекания реакции (32) требуется M

+, специ-

фичность активации и требуемая концентрация иона металла сход-

ны с теми, которые определены для реакции (31) [367]. Следова-

тельно, в этом случае наблюдаются отличия от ацетил-КоА-синте-

таз и их активации под действием MII

(см. выше).

12.2. Синтетазы, катализирующие отщепление

ортофосфата

Хотя для активации всех ферментов этого типа необходимы

ионы M

+, для большинства из них к настоящему моменту этот

факт либо недостаточно исследован, либо, что встречается реже,

плохо изучена специфичность активации под действием M

+. Иск-

лючение составляют ферменты, рассматриваемые ниже.

492

Г лава 10

12.2.1. Формилтетрагидрофолатсинтетаза

Для специфического связывания Mn

+ формилтетрагидрофолат-

синтетазой, как показали СРП-исследовапия [13], необходимо до-

бавление АТФ и АДФ. Так, влияние Mn

+ на увеличение СРП про-

является только при добавлении АТФ или АДФ к системам, содер-

жащим фермент +Mn

+. Эти данные совместно с данными о том,

что Ca

+ является эффективным активатором фермента [369], ука-

зывают, что ион металла, необходимый для активации формилтет-

рагидрофолатсинтетазы, участвует в образовании комплекса фер-

мент— АТФ (АДФ) -M

+ (разд. 2.3). Добавление тетрагидрофо-

лата (или формилтетрагидрофолата) к комплексу фермент —

АТФ — Mn

+ вызывает снижение эффекта связанного Mn

+ вслед-

ствие образования кинетически важных четвертичных комплексов.

Формиаты оказывают сходный, хотя и более слабый, эффект [13].

Эти данные свидетельствуют о том, что субстраты изменяют окру-

жение иона металла в комплексе фермент — нуклеотид — M

+, хо-

тя прямого взаимодействия этих субстратов со связанным марган-

цем не происходит.

12.2.2. Биотинкарбоксилазы

Участие и роль связанных ионов металла в процессе переноса

от промежуточного комплекса фермент — биотин — CO

на

карбоксильный акцептор [реакция (12)] обсуждались в разд. 5.1.

Однако биотинкарбоксилазам также необходима активация легко

диссоциируемыми M

+, который специфически включается в обра-

зование промежуточного комплекса фермент — биотин — CO

из

АТФ+HCOJ [реакция (12)] [370]. К настоящему времени роль

+ в реакции (12) однозначно не определена. Было показано об-

разование диссоциируемого комплекса Mn

+ — пируваткарбоксила-

за. Этот комплекс проявляет эффект усиления СРП, однако значе-

ние его в кинетике реакции не определено, поскольку он содержит

2—3 Mn

+ на остаток биотина. Более того, добавление субстратов

реакции (12) (АТФ и HCO

) вызывает либо небольшое, либо во-

обще не вызывает снижение эффекта усиления СРП комплексом

E—Mn

+. Учитывая то, что Ca

+ является конкурирующим ингиби-

тором пируваткарбоксилазы по отношению к Mn

+ [372], нельзя,

по-видимому, объяснить роль M

+ в реакции (12) участием его в

комплексах E—АТФ—M

+ или E—M

+—АТФ. Однако некоторые

последние кинетические данные указывают на то, что в случае пи-

руваткарбоксилазы из надпочечников овец как Mg

+, так и

MgATФ

, могут принимать участие в реакции (12) [373, 374].

В этой ситуации интерпретация данных магнитного резонанса и

данных ингибирования Ca

+ представляет собой нелегкую задачу.