Иванов А.Т., Петрова В.С., Кенигсберг Я.Э. Ветеринарная токсикология

Подождите немного. Документ загружается.

дартных растворов свинца при построении градуировоч-

ного графика. После подготовки прибора в пламя горел-

ки распыляют последовательно в порядке возрастания

концентрации свинца два стандартных раствора.

слу-

чае сохранения пропорциональности изменения величины

абсорбции с возрастанием концентрации свинца в рас-

творе в пламя горелки распыляют анализируемые рас-

творы и раствор холостого опыта, строго соблюдая по-

стоянство условий спектрофотометрирования. Проводят

два параллельных определения.

Обработка результатов. Содержание свинца рассчи-

тывают по формуле

_ (А — В). 25

~ M

где А —содержание свинца в 1 мл анализируемого рас-

твора, найденного по градуировочному графику, мкг/мл;

В — содержание свинца в 1 мл холостой пробы, мкг/мл;

25 — объем мерной колбы, мл; M — масса навески про-

дукта, г.

Числовой результат округляют до двух знаков после

запятой. Из результатов двух параллельных определений

с тем же числом знаков рассчитывают среднее арифме-

тическое значение, которое округляют до целых единиц.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ МЫШЬЯКА (ПО МАРШУ)

Принцип метода основан на восстановлении водоро-

дом мышьяковой кислоты в мышьяковистый водород,

который, проходя восстановительную трубку, накален-

ную в одном месте, разлагается на мышьяк и водород

(появление мышьяковистого зеркала). Определению

мешает присутствие азотной кислоты и окислов азота,

а также соединений азота, железа, меди, ртути, платины.

Определение содержания мышьяка проводят в специ-

альном приборе, который состоит из плоскодонной склян-

ки диаметром 50 мм и высотой 90 мм, на которую нано-

сят метку до 60 мл. К склянке со шлифом или через ре-

зиновую пробку присоединяют стеклянную трубку диа-

метром 8 мм и длиной 120 мм, от верхнего конца кото-

рой на расстоянии 110 мм сделаны крючки. К верхнему

торцу трубки пришлифована вторая трубка того же диа-

метра, длиной 20 мм с аналогичными крючками, служа-

щими для стягивания обеих трубок резиновыми коль-

цами.

'71

Приготовление реактивов. 1. Раствор двухлористого

олова:

стакан вместимостью

100

мл отвешивают

20 г

двухлористого олова с погрешностью не более 0,01 г, до-

бавляют 80 мл концентрированной соляной кислоты и

небольшое количество металлического олова. Смесь на-

гревают на кипящей водяной бане до полного растворе-

ния, после охлаждения смесь количественно переносят

дистиллированной водой в мерную колбу на 200 мл, до-

водят до метки и перемешивают. Раствор хранят в тем-

ном месте.

2. Стандартный раствор А, содержащий 0,1 мг/мл

мышьяка: в стакан вместимостью 100 мл отвешивают

0,132 г мышьяковистого ангидрида, добавляют 25 мл

25%-ного раствора едкого натрия, перемешивают до пол-

ного растворения соли, добавляют 3—5 капель раствора

индикатора метилового красного и раствор нейтрализу-

ют 10%-ной серной кислотой. Содержимое стакана коли-

чественно переносят в мерную колбу емкостью 1000 мл,

доводят до метки дистиллированной водой и перемеши-

вают. Раствор переливают в полиэтиленовую посуду.

Срок хранения не более одного года.

3. Раствор Б, содержащий 0,001 мг/мл мышьяка: пи-

петкой отбирают 10 мл раствора А, переносят в мерную

колбу вместимостью 1000 мл, доводят до метки дистил-

лированной водой и перемешивают. Раствор переливают

в полиэтиленовый сосуд. Срок хранения не более 3 мес.

4. Синтезированная бромная ртуть: 450 мл азотной

кислоты наливают в стакан емкостью 1000 мл, разбав-

ляют дистиллированной водой в соотношении 1 : 8 и по-

степенно прибавляют 120 г желтой окиси ртути. После

растворения последней дают отстояться образовавшейся

мути и раствор пропускают через бумажный фильтр в

стакан. В полученный фильтрат приливают раствор бро-

мистого натрия, содержащий 130 г соли в 200 мл дистил-

лированной воды. Образовавшийся белый осадок бром-

ной ртути отделяют на воронке Бюхнера под вакуумом

и промывают дистиллированной водой (2—3 раза по

200 мл) до полного удаления нитрат-ионов (по пробам

с дифениламином). Отмытый осадок сушат на перга-

ментной бумаге в сушильном шкафу при 60—70

C до

получения сухого порошка. Бромную ртуть хранят в бан-

ке с пришлифованной крышкой в темном месте.

5. Бромная бумага: в стакан емкостью 100 мл отве-

шивают 2,5 г бромной ртути, добавляют 50 мл этилового

спирта и перемешивают до полного растворения соли.

'72

В полученный раствор погружают нарезанные в виде

квадратов обеззоленные фильтры (15 шт. на 1 г). Затем

их вынимают пинцетом, давая стечь избытку раствора,

раскладывают на стекле, покрывают

листом фильтро-

вальной бумаги и высушивают при комнатной темпера-

туре. Полученную бромную бумагу хранят в банке из

темного стекла с притертой пробкой в темном месте не

более 1 мес.

6. Вата, пропитанная раствором уксусно-кислого

свинца: в стакан емкостью 100 мл отвешивают 1,2 г ук-

сусно-кислого свинца с погрешностью не более 0,01 г,

добавляют 20 мл дистиллированной воды и 2,5 мл кон-

центрированной уксусной кислоты для предотвращения

образования мути. После охлаждения раствор переносят

в мерную колбу емкостью 100 мл, доводят до метки ди-

стиллированной водой и перемешивают. Вату предвари-

тельно обезжиривают в течение 30 мин диэтиловым эфи-

ром, затем пропитывают раствором уксусно-кислого

свинца, сушат на воздухе и хранят в банке с притертой

пробкой.

7. Стандартная шкала концентрации мышьяка: ис-

пользуют 6 приборов для определения мышьяка. Трубку

каждого из них заполняют следующим образом: в длин-

ную часть ее помещают тампон из ваты, пропитанной

раствором уксусно-кислого свинца и высушенной на воз-

духе, сверху и снизу которого помещают слой обычной

ваты толщиной 15 мм. Тампон должен быть рыхлым,

заполнять все сечение трубки и занимать по высоте 4—

5 см. На верхний шлифованный торец трубки укладыва-

ют квадрат бромно-ртутной бумаги 9x9, прижимают его

короткой частью трубки и закрепляют резинками, наде-

ваемыми на крючки обеих трубок.

В склянки приборов из микробюретки или пипетками

вносят 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0 мл раствора Б мышьяка,

что соответствует концентрации 0,0005; 0,001; 0,0015;

0,0020; 0,0025; 0,0030 мг. Затем добавляют 5 мл концент-

рированной серной кислоты и 1 мл раствора двухлорис-

того олова. Объем смеси доводят до метки 60 мл дистил-

лированной воды, вносят 5—6 г (10—11 гранул) цинка,

склянки быстро закрывают пробками с приготовленными

трубками. Через 1,5 ч приборы разбирают и снимают

квадраты бромно-ртутной бумаги. Проявившуюся на них

окраску закрепляют, опуская пинцетом в расплавлен-

ный в фарфоровой чашке парафин. Затем бумажные

квадраты вынимают, давая стечь избытку парафина,

'73

надписывают на каждом концентрацию мышьяка и в по-

рядке

ее возрастания укладывают на дно стеклянной

чашки Петри. После охлаждения парафина закрывают

крышкой и хранят в защищенном от света месте. Срок

хранения не более 3 мес.

Ход анализа. В сухую пробирку, свободно входящую в

горловину конической колбы емкостью 250 мл, насыпают

около 2,5 г продукта и взвешивают с точностью до

0,0002 г. Продукт осторожно пересыпают в коническую

колбу и пробирку взвешивают снова. По разнице между

первым и вторым взвешиваниями определяют массу на-

вески продукта. В колбу с продуктом пипеткой вносят

3 мл концентрированной серной кислоты. Колбу уста-

навливают на электроплитку и обугливают продукт в те-

чение 2—3 мин (до получения однородной черной вязкой

массы). После этого колбу снимают, слегка охлаждают

и приливают пипеткой 5 мл концентрированной азотной и

1 мл концентрированной хлорной кислоты. Колбу снова

помещают на плитку и сжигают продукт, следя за объ-

емом азотной кислоты, и по мере ее испарения добавля-

ют порциями по 5 мл. Наличие азотной кислоты опреде-

ляют по выделяющимся из жидкости бурым парам

окислов азота. Полноту сжигания продукта проверяют

следующим образом. Во время сжигания раствор посте-

пенно становится прозрачным и приобретает желтую

окраску. Когда она станет светло-желтой и устойчивой,

раствор выпаривают досуха, и, если при этом не наблю-

дается почернения осадка, сжигание считают закон-

ченным.

В случае почернения добавляют азотную кислоту и

продолжают сжигание. По окончании реакции остаток

азотной кислоты удаляют двукратным добавлением ди-

стиллированной воды (по 10 мл) и испарением ее почти

досуха.

К полученному таким образом почти сухому остатку

пипеткой приливают 5 мл концентрированной соляной

кислоты, слегка нагревают на плитке до полного раство-

рения, количественно переносят дистиллированной водой

в склянку прибора и добавляют пипетками 5 мл концент-

рированной серной кислоты и 1 мл раствора двухлорис-

того олова. Объем смеси доводят дистиллированной во-

дой до метки 60 мл, добавляют 5—6 г гранулированного

цинка и далее продолжают как при приготовлении стан-

дартного раствора, вплоть до парафинирования бромной

бумаги. •

'74

Концентрацию мышьяка определяют сравнением ин-

тенсивности окраски полученного пятна бромно-ртутной

бумаги со стандартной шкалой

мышьяка.

Проводят два параллельных определения. При этом

навески продукта необходимо брать так, чтобы они не

отличались более чем на 0,1 г. В тех же условиях выпол-

няют холостой опыт без продукта, начиная со стадии

внесения в коническую колбу 3 мл концентрированной

серной кислоты.

Расчетсодержания мышьяка в пробе проводят по

формуле

_ (A-B)- 1000

~ M

где А — количество мышьяка во взятой навеске, опреде-

ленной по стандартной шкале, мг; В — количество

мышьяка, определенного по стандартной шкале в холос-

том опыте, мг; M — масса навески; 1000 — пересчет со-

держания мышьяка на 1 кг продукта.

Из результатов двух параллельных определений с

тем же числом знаков рассчитывают среднее арифмети-

ческое значение и определяют расхождение между каж-

дым результатом и средним арифметическим значением

(САЗ). Расхождение не должно превышать 10 %. За

окончательный результат испытания принимают САЗ,

которое округляют до целых единиц. Если оно до округ-

ления составляет 0,5 мг/кг, окончательный результат за-

писывают «менее 1 мг/кг».

ОПРЕДЕЛЕНИЕ НИТРАТОВ И НИТРИТОВ

Принцип метода определения нитритов основан на фо-

тометрическом измерении интенсивности окраски азо-

соединения розово-малинового цвета, образующегося

при реакции нитритов с а-нафтиламином и сульфанило-

вой кислотой (реактив Грисса) в кислой среде после вод-

ного извлечения их из исследуемых проб. Реакция спе-

цифична для нитритов.

Предел определения нитритов составляет 0,05 мг/кг, л,

нитратов — 0,5 мг/кг, степень определения нитритов —

90± 10, нитратов —83± 17 %.

Приготовление реактивов. 1. Раствор Грисса: а) 0,5 г

сульфаниловой кислоты растворяют в 150 мл 12%-ного

раствора уксусной кислоты; б) 0,1 г а-нафтиламина рас-

творяют (при нагревании) в 20 мл дистиллированной во-

ды, фильтруют и смешивают со 150 мл 12%-ного раство-

'75

pa уксусной кислоты. Растворы а и б хранят в холодиль-

нике, перед употреблением равные части их смешивают.

2. Стандартный раствор нитрита натрия: 0,15 г

NaNO

, высушенного до постоянного веса при темпера-

туре 80

C, растворяют в 1 л дистиллированной воды,

свободной от нитритов. В 1 мл раствора содержится

0,100 мг (100 мкг) NO

". Хранят его в холодильнике не

более 1 мес.

3. Рабочий раствор нитрита натрия: 25 мл получен-

ного стандартного раствора переносят в мерную колбу

емкостью 500 мл и доводят объем до метки дистиллиро-

ванной водой. Раствор должен быть свежеприготовлен-

ным, в 1 мл его содержится 0,0050 мг NOi". Его использу-

ют для построения градуировочного графика.

4. Стандартный раствор нитрата калия: 1,630 г нит-

рата калия, высушенного до постоянного веса при 105 °С,

растворяют дистиллированной водой в мерной колбе ем-

костью 100 мл и доводят объем до метки. В 1 мл раство-

ра содержится 1 мг NOi"-Срок хранения в холодильнике

не более 3 мес.

5. Рабочий раствор нитрата калия: 1 мл стандартно-

го раствора нитрата калия пипеткой переносят в мерную

колбу емкостью 100 мл и доводят объем до метки 12%-

ным раствором уксусной кислоты. В 1 мл раствора со-

держится 0,010 мг NOjT- Раствор должен быть свежепри-

готовленным. Его используют для построения градуиро-

вочного графика.

6. Реактив для восстановления нитратов в нитриты:

а) барий серно-кислый, высушенный при IOO

C до по-

стоянного веса,— 100 г; б) марганец серно-кислый, про-

каленный при 200

C в течение 1 ч,— 10,0 г; в) цинковая

пыль — 2 г; г) лимонная кислота — 75,0 г; д) сульфани-

ловая кислота — 4 г; е) а-нафтиламин — 2 г.

Каждый компонент тщательно растирают в ступке,

перемешивают до получения однообразной массы. Полу-

ченный реактив хранят в склянке из темного стекла.

Срок хранения — 2 года.

7. Пленка для диализа, которую перед использовани-

ем помещают на 30—40 мин в дистиллированную воду.

При проведении диализа ее следует брать с запасом по

отношению к пробе так, чтобы узел мешочка в ходе ис-

следования не был опущен в воду.

Построение градуировочного графика для определе-

ния нитритов, В 11 химических пробирок наливают рабо-

'76

чии раствор нитрита натрия в количествах, указанных

в табл. 10, затем добавляют дистиллированную воду до

объема 10 мл, приливают по 1 мл реактива Грисса и

энергично встряхивают.

Таблица 10. Приготовление шкалы стандартов на нитриты

Номер

про-

бирки

Рабочий

раствор,

мл

Содержание

NO^", мкг

Номер пробир-

Рабочий раст-

вор, мл

Содержание

NOiT", мкг

1 0,1 0,5

1,2

6,0

2 0,2 1,0 8

1,4

7,0

0,4

2,0 9 1,6 8,0

0,6 3,0

1,8

9,0

0,8

4,0 11

2,0

10,0

1,0

5,0

2,0

10,0

Для построения градуировочной кривой через 15 мин

после начала окрашивания определяют оптическую плот-

ность растворов на фотоэлектроколориметре при зеле-

ном светофильтре (длина волны 540 нм), ширине кюве-

ты 10 мм, раствор для сравнения — дистиллированная

вода.

На оси абсцисс откладывают количество нитрит-

ионов (мкг), на оси ординат — значения оптической

плотности растворов и проводят линию через точки пере-

сечения. Эта же шкала стандартов может быть исполь-

зована для визуального сравнения с опытными пробами.

Построение градуировочного графика для определе-

ния нитратов. В 7 химических или центрифужных проби-

рок с притертыми пробками последовательно вносят

0,3 г реактива для восстановления нитратов, рабочий

раствор и 12%-ную уксусную кислоту в количествах,

указанных в табл. 11 (общий объем 10 мл).

Таблица 11. Приготовление шкалы стандартов на нитраты

Номер пробир-

ки

Рабочий раствор,

мл

Содержание

ЫОГ", мкг

12%-ная уксусная кио-

лота, мл

1 0,0 , 10,0

2 1,0 10 9,0

3 2,0 20 8,0

4 4,0 40 6,0

5 6,0 60 4,0

6 8,0 80 2,0

7 10,0 100 0,0

'77

Затем пробирки закрывают пробками и энергично

встряхивают в течение 2 мин. Через 10 мин пробы цент-

рифугируют в центрифужных пробирках при 5—6 тыс.

об/мин в течение 5 мин. Далее проводят колориметри-

ческое определение интенсивности окраски раствора при

длине волны 540 нм, кюветы— 10 мм, раствор для срав-

нения— 12%-ная уксусная кислота, обработанная, как

пробы, сухим восстановителем и прошедшая центрифуги-

рование (пробирка № 1).

На оси абсцисс откладывают количество нитрат-

ионов (мкг), на оси ординат — найденные значения оп-

тической плотности растворов и проводят линию через

точки пересечения. Эта шкала стандартов может быть

использована для визуальных определений.

Ход анализа. Извлечение нитратов и нитритов из проб

кормов проводят методом диализа. Для этого точно от-

меривают 50—100 мл дистиллированной воды и исполь-

зуют этот объем в ходе анализа. Ппобу кормов измель-

чают, навеску ее 2—10 г помещаю-i

пленку для диали-

за, приливают такое количество дйс тлированной воды

из первоначального объема, чтобы Oi хорошо смочила

пробу. Пленку завязывают в виде ме очка, весь остав-

шийся объем дистиллированной воды наливают в хими-

ческий стаканчик, опускают в него мешочек до полного

погружения пробы и оставляют на 1,5—2 ч. Затем, не вы-

нимая мешочка из стакана, пипеткой отбирают 10 мл

диализата для анализа на нитриты и 5 мл — на нитраты

и проводят определение.

20—50 мл крови и 2—10 г органов или тканей живот-

ных помещают в диализный мешочек и опускают в хи-

мический стаканчик с прокипяченной горячей дистилли-

рованной водой. Через 1,5—2 ч пипеткой отбирают 10 мл

диализата для анализа на нитриты и 5 мл — на нитраты

и проводят определение.

Если раствор в стакане после диализа окрашенный

или мутный, его используют после очистки.

Пигменты удаляют путем фильтрования небольшого

объема диализата через воронку с бумажным фильтром,

заполненным на 2/3 активированным углем, предвари-

тельно промытым 50 мл прокипяченной дистиллирован-

ной воды. Затем фильтруют объем диализата, необходи-

мый для анализа на нитриты и нитраты. В случае

необходимости проводят повторное фильтрование через

свежую порцию активированного угля, промытого водой,

до полного исчезновения окраски диализата.

При наличии в диализате мути проводят осаждение

белков смесью 0,5 M раствора NaOH и 5%-ного раствора

сульфата цинка (2:5). Для этого отбирают из стакана

30 мл диализата, переносят его в другой стаканчик или

колбу и добавляют 10—20 мл вышеуказанной смеси. Пос-

ле выпадения осадка диализат фильтруют, измеряют

объем и отбирают 5 мл для анализа на нитраты и

10 мл — на нитриты.

В этом случае при расчете содержания нитратов и

нитритов следует учитывать сумму объема диализата,

оставшегося в первом стаканчике (20 мл), и объема

фильтрата, измеренного после осаждения белков и

фильтрования.

20—50 мл молока, молозива, обрата переносят в

пленку для диализа и приливают 2—4 мл 12%-ной ук-

сусной кислоты, перемешивают содержимое стеклянной

палочкой, завязывают пленку и опускают в стакан с го-

рячей прокипяченной дистиллированной водой. Затем

через 1,5—2 ч отби *ют 5 мл диализата для анализа на

нитраты и 10 мл- • а нитриты и проводят определение.

Если в растворе ;ле диализа есть муть, необходимо

провести осажд ие белков. Для этого отбирают 20—

30 мл диализата добавляют 10—20 мл смеси 0,5 M раст-

вора NaOH и 5%-ного раствора сульфата цинка (2:5).

После выпадения осадка диализат фильтруют, измеряют

объем фильтрата и отбирают пипеткой 5 мл для анали-

за на нитраты и 10 мл — на нитриты.

2—10 г измельченных картофеля, сахарной свеклы и

бахчевых культур, дающих с водой неокрашенные раст-

воры, помещают в колбу и заливают 50—100 мл дистил-

лированной воды. Перемешивают в течение 10—15 мин и

отбирают аликвотные количества для анализа на нитра-

ты и нитриты. При необходимости фильтруют небольшой

объем экстракта через активированный уголь.

Ход анализа. Для анализа на нитриты в пробирку с

10 мл диализата добавляют 1 мл реактива Грисса, встря-

хивают и через 15 мин после появления окраски проводят

измерение оптической плотности раствора на фото-

электроколориметре при зеленом светофильтре. Длина

волны 540 нм, кюветы— 10 мм против дистиллирован-

ной воды.

Для анализа на нитраты в пробирку с притертой проб-

кой насыпают 0,3 г сухого восстановителя, добавляют

5 мл диализата, 5 мл 12%-ной уксусной кислоты, закры-

вают и энергично встряхивают в течение 2—3 мин (время

выдерживать строго).

В другую пробирку насыпают 0,3

сухого восстанови-

теля и добавляют 10 мл 12%-ной уксусной кислоты, за-

крывают ее пробкой и встряхивают в течение 2 мин (хо-

лостая проба).

Через 10 мин содержимое пробирок переливают в

центрифужные и центрифугируют при 5—6 тыс. об/мин

в течение 5 мин. Затем проводят колориметрирование

проб на ФЭК при зеленом светофильтре (длина волны

540 нм, кюветы — 10 мм). В качестве раствора для срав-

нения используют холостую пробу.

Если в пробах устанавливается наличие большего

содержания нитритов, свыше 20 мкг (интенсивная окрас-

ка в пробирке), их следует удалять, так как они несколь-

ко завышают результаты определения нитратов. Для

этого к диализату прибавляют 2—4 мл 1%-ного раствора

сульфаминовой кислоты, перемешивают стеклянной па-

лочкой и оставляют на 5 мин. Затем отбирают 5 мл диа-

лизата для анализа на нитраты и проводят анализ, как

описано выше. При расчетах учитывают увеличение

общего объема пробы.

После колориметрирования проб по соответствую-

щим калибровочным кривым находят количество нит-

ратов и нитритов, подставляют их в формулу для расче-

та и определяют содержание.

Если при определении содержания нитратов обра-

зуется интенсивная окраска, не укладывающаяся при

определении оптической плотности в пределы градуиро-

вочного графика, нужно взять меньшее количество об-

разца для анализа или разбавить раствор диализата.

Расчет результатов проводят по формуле

где X — содержание нитритов (нитрит-ионов) или нит-

ратов (нитрат-ионов), мг/кг; В — содержание нитрит-

ионов или нитрат-ионов, найденные по соответствующим

градуировочным графикам, мкг; А — навеска анали-

зируемого образца, г; Yj — общий объем фильтрата, мл

(соответственно 50, 100 или другие объемы с учетом раз-

ведения) ; Y

— объем фильтрата, взятый для анализа,

мл (5 мл или 10 мл соответственно).