Иванов А.Т., Петрова В.С., Кенигсберг Я.Э. Ветеринарная токсикология

Подождите немного. Документ загружается.

токсичность. Корма, содержащие афлатоксины в коли-

честве выше установленных максимально допустимых

уровней, скармливать животным запрещается. В нашей

стране максимально допустимый уровень афлатоксина

Bi в кормах установлен для лактирующих коров —

0,025 мг/кг рациона, для крупного рогатого скота на от-

корме—0,100 мг/кг, для телят до 4-месячного возраста

и стельных коров не допускается.

ОХРАТОКСИКОЗ

Заболевание животных, возникающее при скармли-

вании кормов, содержащих охратоксины. Основными

продуцентами охратоксинов являются грибы A. ochra-

ceus, P. viridicatum и некоторые другие виды. Большин-

ство токсигенных штаммов A. ochraceus, кроме охра-

токсина, образуют пеницилловую кислоту, а P. viri-

dicatum — цитринин. Поэтому корма, пораженные

токсическими штаммами этих грибов, кроме охратокси-

нов содержат пеницилловую кислоту и цитринин.

Известно 4 охратоксина — А, В, С и Д, из них наибо-

лее токсичен охратоксин А. Они избирательно действуют

на почки, вызывая некроз проксимальных канальцев. На-

ряду с нефротоксичностью охратоксины проявляют не-

высокую гепатотоксичность, а также обладают терато-

генными свойствами (В. А. Тутельян, Я. В. Кравченко,

1981). Наиболее чувствительны к ним свиньи и собаки.

Биохимические изменения в крови животных харак-

теризуются увеличением общего белка, креатинина, мо-

чевины, активности ЛДГ и щелочной фосфатазы. Охра-

токсины нарушают обмен гликогена, синтез белка и РНК,

оказывают иммунодепрессивное действие.

Клинические признаки. Чаще всего заболевание про-

текает в хронической форме и характеризуется сниже-

нием массы тела и потребления корма. Отмечается

полиурия, угнетенное состояние, в крови лейкоцитоз, сни-

жение количества эритроцитов, гемоглобина.

Наиболее чувствительны молодые животные. У супо-

росных свиноматок возможны аборты, рождение нежиз-

неспособного потомства.

Патоморфологические изменения характеризуются ка-

таральным воспалением слизистой оболочки желудка и

тонких кишок. Печень неравномерно окрашена. Почки

незначительно увеличены, имеют диффузные или огра-

ниченные

более светлые участки. У телят отмечают фиб-

'151

ринозный перитонит, уплотнение почек, геморрагии на

слизистой оболочке сычуга, у птицы — бледность и жел-

тушность печени с очаговыми кровоизлияниями.

При гистологическом исследовании устанавливают

некроз клеток проксимальных канальцев почек, разрас-

тание соединительной ткани в корковом слое.

Диагноз на охратоксикоз ставят на основании клини-

ческих признаков патолого-анатомических изменений,

микотоксикологического анализа корма и патологическо-

го материала.

Лечение при охратоксикозе не разработано. Приме-

няют симптоматические средства и обязательно исклю-

чают из рациона корма, содержащие охратоксин.

Профилактика. Необходимо установить постоянный

контроль за ветеринарно-санитарным состоянием кормов

и не допускать к скармливанию недоброкачественные

корма и содержащие охратоксины. По данным А. Н. Лео-

нова (1980), максимально допустимым уровнем охра-

токсина в кормах следует считать 0,1 мг/кг для жвачных

и 0,05 мг/кг для свиней."

РУБРОТОКСИКОЗ

Заболевание животных, возникающее при скармлива-

нии кормов, содержащих рубротоксины. Продуцентами

рубротоксинов являются грибы P. rubrum и P. purpuro-

genum. Выявлены рубротоксины А, В и С. Наиболее

распространен рубротоксин В, но самым высоким ток-

сическим действием обладает рубротоксин С. К рубро-

токсинам в основном чувствительны свиньи.

Клинические признаки заболевания характеризуются

беспокойством, частым отказом от корма. Животные

больше лежат, у некоторых наблюдают диарею или за-

пор, покраснение кожи ушей, головы, живота, паха. Наи-

более остро болезнь протекает у поросят, так как токсин

способен выделяться с молоком у свиноматок. У поросят

наблюдают диарею, коматозное состояние, гибель насту-

пает на 3—5-й день.

Патюлого-анатомические изменения^ свиноматок Ха-

рактеризуются резко выраженным катаральным гастро-

энтеритом, особенно тонкой кишки. Стенки желудка

утолщены до 1,5—2 см, с большими складками слизистой

оболочки. Печень и почки неравномерно окрашены.

У павших поросят отмечают резко выраженное катараль-

'152

ное воспаление слизистой дна желудка и тонких кишок.

Печень и почки темного цвета, переполнены кровью.

Диагноз ставят на основании клинических признаков,

патолого-анатомических изменений, выделения из корма

гриба-продуцента и воспроизведения заболевания в экс-

перименте культурой данного гриба.

Лечение симптоматическое, увеличивают дозу зеле-

ных кормов, вводят витамин Е.

Профилактика такая же, как и при других микоток-

сикозах.

ЗЕAPAJLEНОНТОКСИКОЗ (Ф-2-ТОКСИКОЗ)

Заболевание преимущественно свиней, связанное со

скармливанием им кормов, содержащих зеараленон

(токсин Ф-2) или его токсические метаболиты — альфа-

и бета-зеараленолы. Продуцируют этот микотоксин гри-

бы F. graminearum и F. moniliforme.

Зеараленон обладает выраженным эстрогенным дей-

ствием, острое токсическое (летальное) действие отсут-

ствует даже при введении больших доз.

Чувствительность свиней к зеараленону зависит от

возраста, пола, условий содержания и кормления. Наи-

более чувствительны к нему свинки и хрячки в возрасте

2—5 мес.

Заболеванию животных способствует содержание в

закрытых помещениях, дефицит витаминов и легкоусво-

яемых углеводов. Малочувствительны к токсину подсос-

ные поросята до 1 мес и взрослые свиноматки. Попав-

ший в организм свиней зеараленон всасывается в

желудке и тонких кишках, а частично проходит через

желудочно

;

кишечный тракт и выделяется с фекалиями.

Усвоенный микотоксин в печени метаболизируется до

альфа- и бета-зеараленола. Альфа-зеараленол в 3—4 ра-

за, а бета-зеараленол в 1,2 раза активнее по эстрогенно-

му действию, чем зеараленон.

Клинические признаки. Наиболее характерными кли-

ническими признаками являются покраснение и отеч-

ность вульвы и влагалища. Иногда наблюдают выпаде-

ние влагалища и прямой кишки. У хрячков развивается

орхит, отек препуция и молочных желез. У свиноматок

изменяется эстральный цикл, атрофируются яичники,

снижается плодовитость, возможна мумификация и рас-

сасывание плодов.

Патолого-анатомические изменения устанавливают в

6 Зак. 1116

153

основном в половых органах. Степень проявления их за-

висит от величины дозы токсина, длительности скармли-

вания, возраста и пола животного. Наблюдают увеличе-

ние матки и молочных желез у неполовозрелых свинок,

отечность и гиперемию вульвы. Возможно частичное вы-

падение прямой кишки и влагалища.

Диагноз ставят комплексно на основании клиниче-

ских признаков, патолого-анатомических изменений об-

наружения зеараленона в корме.

Профилактика. Корма, содержащие зеараленон, до-

пускается скармливать только крупному рогатому скоту

и овцам.

Т-2-ТОКСИКОЗ

Заболевание животных, возникающее вследствие

скармливания кормов, содержащих микотоксин Т-2. Про-

дуцентами токсина являются грибы F. tricinctum, F. роае,

F. avenaceum и др. Это один из наиболее изученных ми-

котоксинов, объединенных в группу трихотеценов.

Токсин Т-2 всасывается в кровь из желудка и тонких

кишок и быстро распределяется в органах и тканях жи-

вотного. Он избирательно действует на тимус, костный

мозг, лимфатические узлы. В организме он метаболизи-

руется в HT-2-токсин и ниваленол.

Биологическое действие токсина Т-2 заключается в

ингибировании биосинтеза белка, поражении сердечно-

сосудистой и нервной систем, угнетении развития лим-

фоидных органов, ухудшении биосинтеза антител при

активной иммунизации.

К токсину Т-2 очень чувствительны свиньи. Он хоро-

шо всасывается кожей, вызывая резко выраженную вос-

палительную реакцию с последующим некрозом.

Клинические признаки. Заболевание животных про-

текает остро, подостро и хронически. При остром и под-

остром отравлении наблюдают угнетение, саливацию,

изъязвление слизистой оболочки ротовой полости, языка,

губ, носа. У свиней развиваются отеки в области глот-

ки, головы, шеи, отмечается парез задних конечностей.

Температура тела в пределах нормы или понижена.

Хроническое течение болезни сопровождается сниже-

нием аппетита, продуктивности, язвенным стоматитом,

повышением чувствительности животных к различным

заболеваниям.

Патолого-анатомические изменения характеризуются

'154

геморрагическим воспалением желудка и тонкого кишеч-

ника, изъязвлением слизистой оболочки ротовой полос-

ти, языка и пищевода. Точечные и пятнистые кровоиз-

лияния под легочной и костальной плеврой, эпи- и эндо-

кардом. Печень умеренно наполнена кровью, желчный

пузырь переполнен желчью.

Диагноз ставят комплексно на основании клинических

признаков, патолого-анатомических изменений и микоток-

сикологического исследования кормов.

Лечение в основном симптоматическое. Необходимо

обязательно исключить из рациона корма, содержащие

Т-2 токсин, или подозрительные по качеству, подверг-

нув их микотоксикологическ'ому анализу. Из рациона

исключают кислые корма и назначают корма, богатые

витаминами, белками и углеводами.

Профилактика такая же, как и при других микоток-

сикозах.

МИКОТОКСИКОЗЫ, ВЫЗЫВАЕМЫЕ ТОКСИНАМИ

ДРУГИХ ВИДОВ ГРИБОВ, ПОРАЖАЮЩИХ КОРМА

Гриб A. fumigatus поражает зерно, грубые корма в

период их хранения, продуцирует ряд микотоксинов: ней-

ротоксин, глиотоксин, фумагилин, фумигатин, фумитре-

моргены А и В, коевую и гельволевую кислоты. Токсины

экстрагируются эфиром, ацетоном, спиртом и водой.

В естественных условиях болеют лошади и свиньи. Ми-

котоксины вызывают поражение нервной системы, воз-

буждение, тремор, атаксию, судороги, дистрофические

явления. Наблюдается геморрагический диатез, крово-

излияния на слизистой оболочке желудочно-кишечного

тракта, во внутренние органы.

Грибы A. clavatus, P. urticae, Byssochlamys nivea Wes-

tling являются продуцентами токсичного антибиотика

патулина. В естественных условиях поражают солодовые

ростки, силос, пшеничную солому, фруктовые соки и вы-

жимки, фрукты. Болеют чаще травоядные. У свиней бо-

лезнь наблюдается при скармливании им пораженных

грибами яблок или выжимок. Патулин оказывает прото-

плазматическое, общетоксическое, канцерогенное дейст-

вие. У животных вызывает нервные явления, судороги,

расстройства желудочно-кишечного тракта, у свиней

возможны отек легких, скопление серозной жидкости в

грудной и брюшной полостях.

155

Гриб P. viridicatum довольно часто поражает корма

во время хранения, растет и образует токсины при тем-

пературе 20—27

C. Помимо пеницилловой кислоты не-

которые штаммы образуют щавелевую кислоту и вириди-

катумтоксин.

Щавелевая кислота в кишечнике образует нераство-

римые в воде соли кальция, нарушая его усвоение орга-

низмом. Виридикатумтоксин способен избирательно по-

ражать сердечную мышцу. ЛД50 его — 2,8 мг/кг массы

тела.

Грибы A. versicolor, A. nigulans, A. parasiticus, A. fla-

vus способны поражать зернофураж при неудовлетвори-

тельных условиях хранения. Грубые корма, особенно се-

но зернобобовых, поражаются грибом A. parasiticus. Ток-

сичные штаммы этих грибов способны продуцировать

микотоксин стеригматоцистин, способный вызывать

острые и хронические отравления у большинства видов

животных. Наиболее чувствительны птицы. ЛД

стериг-

матоцистина для крыс при введении внутрь составляет

60 мг/кг. Обладает сильным канцерогенным действием,

вызывает поражение печени, почек, желудочно-кишечно-

го тракта. При скармливании кормов, содержащих сте-

ригматоцистин, наиболее характерным патоморфологи-

ческим признаком является цирроз, жировое перерожде-

ние печени.

Гриб P. verruculosum и ряд других вызывают порчу

плохо хранящихся кормов и продуктов и способны обра-

зовывать треморгенные микотоксины, основными пред-

ставителями которых являются пенитремы А, В, С, Д и Е.

Эти микотоксины поражают центральную нервную си-

стему и вызывают тремор мышц. Чувствительны мыши,

крысы, собаки, цыплята, крупный рогатый скот, овцы и

лошади. ЛД

пенитремов А и В составляет для мышей

1,05 и 5, 84 мг/кг.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТОКСИЧНОСТИ КОРМОВ

Принцип метода основан на дермонекротическом дей-

ствии токсических веществ микогенного происхождения,

извлекаемых из корма диэтиловым эфиром или ацетоном.

Методика предназначена для определения токсичности

фуражного зерна и продуктов его переработки, комби-

кормов и других видов концентрированных кормов (за

исключением жмыхов, шротов и кормовых дрожжей), а

также грубых кормов.

'156

Получение экстракта. В банку или колбу с притертой

пробкой вместимостью 500 см

помещают 50 г измель-

ченного корма, заливают 150 мл диэтилового эфира, или

эфира для наркоза, или ацетона и экстрагируют 24 ч при

комнатной температуре, периодически встряхивая вруч-

ную или на шуттель-аппарате, в течение 3 ч. Экстракт

фильтруют через бумажный фильтр в выпарительную

чашку. Эфир выпаривают до полного исчезновения за-

паха.

У кролика массой 2—2,5 кг в области бедра, лопатки

или бока в день постановки биопробы тщательно выстри-

гают участок кожи размером 6x6 см и стеклянной ло-

паточкой наносят, слегка втирая, половину экстракта.

Через 24 ч наносят оставшуюся часть.

Для предупреждения слизывания экстракта, нанесен-

ного на кожу, на шею кролику надевают воротник, кото-

рый снимают не ранее, чем через 3 дня. Учет реакции

ведут на следующий день после повторного нанесения

экстракта и продолжают в течение 3—5 дней в зависи-

мости от развития реакции.

Оценка результатов исследования. Корм нетоксич-

ный — отсутствие воспалительной реакции или наличие

гиперемии, сохраняющейся не более 2 сут после нанесе-

ния экстракта и не сопровождающейся шелушением

кожи.

Корм слаботоксичный — гиперемия, сохраняющаяся

2—3 сут и заканчивающаяся шелушением кожи, или ги-

перемия, болезненность и отечность, проявляющаяся не-

значительным утолщением кожи с последующим образо-

ванием отдельных корочек.

Корм токсичный — резкая гиперемия, болезненность,

складчатость, отек, проявляющийся сильным утолщением

кожи, на всей поверхности участка появляются язвы, за-

тем сплошной струп.

В качестве дополнительного может быть использован

метод определения токсичности кормов на рыбах гуппи,

позволяющий обнаруживать микотоксины трихотецено-

вой группы, стеригматоцистин, патулин.

Токсичность жмыхов, шротов и кормовых дрожжей

определяют на белых мышах.

Навеску кормовых средств 100 г (жмых предваритель-

но измельчают) помещают в колбу с притертой пробкой,

заливают 300 мл ацетона и экстрагируют при встряхи-

вании в течение 2—3 ч или оставляют при комнатной

температуре на 24 ч, периодически встряхивая. Экстракт

'157

фильтруют через бумажный фильтр в выпарительные

чашки, добавляют в него 2,5 мл растительного масла

(кроме экстракта из жмыхов). Выпаривают ацетон на

водяной бане при температуре 45—50

C под вытяжным

шкафом до исчезновения запаха.

Для опыта берут 5 белых мышей весом 20—25 г, вы-

держивают без корма 4—5 ч, затем шприцем с тупой

иглой длиной 3—4 см вводят однократно через рот в же-

лудок 0,5 мл экстракта. Наблюдают за мышами в тече-

ние 3 сут, не ограничивая их в кормлении и поении. При

отсутствии падежа мышей убивают эфиром и вскрывают.

Учет токсичности. Корм нетоксичный — мыши живы,

при вскрытии убитых патолого-анатомических измене-

ний не обнаруживают.

Корм слаботоксичный — мыши живы, при вскрытии

убитых выявляют геморрагическое воспаление желудоч-

но-кишечного тракта, чаще очаговое.

Корм токсичный — гибнут все или' хотя бы одна

мышь, при вскрытии павших и убитых устанавливают

геморрагическое воспаление желудочно-кишечного трак-

та, часто сопровождающееся дегенерацией печени, почек

или кровоизлияниями в паренхиматозных органах.

В случае, когда указанными выше методами не вы-

является токсичность корма при наличии отравлений в

хозяйствах, ее можно установить методом скармливания

одному из видов лабораторных животных: цыплятам,

утятам, голубям, белым мышам, морским свинкам, кро-

ликам. Скармливание проводят не менее 10 дней подряд.

Показателями токсичности кормов при постановке

биопробы являются снижение живой массы, расстройства

желудочно-кишечного тракта и центральной нервной си-

стемы (дрожь, угнетение или возбуждение, нарушение

координации движений, судороги, параличи); у цыплят

и утят — цианоз гребня и сережек, сонливость, нередко

понос, развитие анемии, судороги, параличи: у голубей —

рвота.

Токсичные корма могут вызывать гибель подопытных

животных без проявления клинических признаков.

Если после скармливания исследуемого корма в сро-

ки наблюдения (10 дней) гибель подопытных животных

не наступает, их убивают и вскрывают. При вскрытии

обнаруживают катаральное воспаление желудочно-ки-

шечного тракта, иногда кровоизлияния, а также дегене-

ративные изменения паренхиматозных органов. Для птиц

'158

характерен гепатит различной интенсивности (цвет пече-

ни оранжевый, желтый и др.) в зависимости от степени

токсичности корма.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКОТОКСИНА Т-2

Принцип метода основан на извлечении токсина аце-

тоном, очистке экстракта от липидов и растительных пиг-

ментов гексаном, переэкстракции токсина в хлороформ с

последующей дополнительной очисткой хлороформного

экстракта на хроматографической колонке, концентриро-

вании очищенного экстракта и двукратном хроматогра-

фировании его на пластинке силуфол. Чувствительность

определения — 600 мкг/кг. Время проведения одного ана-

лиза — два дня.

Подготовка реактивов. 1. Реактив для обнаружения —

20%-ный спиртовой раствор серной кислоты: 11,5 мл

серной кислоты небольшими порциями при осторожном

перемешивании переносят в мерную колбу емкостью

100 мл с небольшим количеством этилового спирта (15—

20 мл). После охлаждения раствора постепенно при по-

стоянном перемешивании добавляют в колбу этиловый

спирт до метки. Охлаждают при комнатной температуре

и окончательно доводят раствор в колбе спиртом до

метки.

2. Система растворителей: а) гексан смешивают с

этилацетатом в соотношении 1:1. Высота слоя налитой

в хроматографическую камеру жидкости не должна пре-

вышать 0,5 см; б) толуол смешивают с этилацетатом и

муравьиной кислотой в соотношении 6:3:1 или хлоро-

форм смешивают с этилацетатом и ледяной уксусной кис-

лотой в соотношении 17:3: 1.

3. 2%-ный водный раствор азотно-кислого серебра.

4. Силикагель: силикагель KCK размалывают на ша-

ровой мельнице и заливают на 18—20 ч соляной кисло-

той, разбавленной водой 1:1. Затем кислоту сливают и

силикагель промывают водой до отсутствия в промыв-

ных водах следов иона хлора. После этого силикагель

промывают ацетоном, просушивают под тягой до исчез-

новения запаха ацетона, а затем высушивают в сушиль-

ном шкафу при температуре 130 °С в течение 4—6 ч.

Очищенный и высушенный силикагель просеивают через

сито. Для заполнения хроматографической колонки

используют его фракцию 120—200 меш. Хранят силика-

гель в плотно закрытых сосудах.

'159

Окись кальция, силикагель и пластинки силуфол пе-

ред

употреблением

активируют нагреванием в сушильном

шкафу при температуре IOO

C в течение 1 ч. Окись каль-

ция предварительно растирают в фарфоровой ступке.

5. Стандартный раствор микотоксина Т-2: 0,0250 г

(точная навеска) кристаллического микотоксина Т-2

взвешивают в стаканчике емкостью 25 мл, переносят с

помощью этилового спирта или ацетона в мерную колбу

емкостью 50 мл и доводят объем раствором спирта или

ацетона до метки. В 1 мл раствора содержится 0,5 мг

Т-2. Раствор устойчив в течение 3 мес при хранении на

холоде.

Подготовка хроматографической колонки. Колонку

размером 20X1,5 см заполняют в следующем порядке:

тампон гигроскопической ваты, 1 г силикагеля, 2 г окиси

алюминия, 2 г окиси кальция. Силикагель и окись алю-

миния вносят небольшими порциями, слегка постукивая

по колонке. Для удаления пузырьков воздуха ее промы-

вают небольшим количеством хлороформа (15—20 мл)

при отсасывании водоструйным насосом. Окись кальция

вносят в колонку в виде хлороформной суспензии также

при отсасывании водоструйным насосом.

Ход анализа. Средний образец зерна измельчают в

кофемолке и перемешивают. Отбирают навеску 25 г в

патрон, свернутый из полоски фильтровальной бумаги

(12x13 см) в виде цилиндра и помещают в аппарат Сок-

слета, объем экстракта которого равен 100 мл. В колбу

аппарата заливают 125 мл ацетона и проводят экстрак-

цию на кипящей водяной бане в течение 6—8 ч. По ис-

течении этого времени из экстракта на водяной бане по-

следовательно отгоняют ацетон, вначале с помощью

перегонного аппарата при температуре 100°С до получе-

ния концентрата небольшогсг объема, а затем без пере-

гонного аппарата при температуре 80

C до получения

остатка 2—5 мл.

Остаток из колбы переносят в делительную воронку

емкостью 150—200 мл с помощью 25 мл ацетона. Затем

к ацетоновому экстракту в делительной воронке прибав-

ляют 25 мл гексана, перемешивают 1—2 мин и добав-

ляют 50 мл воды. После разделения слоев гексановую

фракцию (верхний слой) удаляют, а нижний слой повтор-

но экстрагируют 25 мл гексана при встряхивании ворон-

ки в течение 1—2 мин. Выделившийся после отстаивания

смеси гексановый слой снова удаляют, а водно-ацетоно-

'160