
Лабораторна діагностика вірусних хвороб
35
полістиролових планшетів сенсибілізують антигеном, до якого ви-
значають антитіла. У лунки додають спочатку дослідні сироватки, а
потім після відмивання — антивидовий кон’югат і нарешті — суб-
страт. Якщо в дослідній сироватці є антитіла, утворюються складні
комплекси: антиген – антитіло – антивидове антитіло (мічене фер-
ментом), і в результаті субстрат розкладається з утворенням кольо-
рового продукту ферментативної реакції.
Для проведення ІФА на полістиролових планшетах зарубіжні фі-
рми випускають комплекти приладів. Основна частина комплектів —
обладнані мікрокомп’ютерами спектрофотометри, за допомогою яких
вимірюють оптичну щільність продукту ферментативної реакції без-
посередньо в лунках планшетів. Зчитування результатів досліджен-
ня 96 проб триває всього 1 хв. Ці прилади дають змогу проводити до-
слідження як у лабораторіях, так і в польових умовах. Для великих
клінічних центрів розроблено повністю автоматизоване устаткування
для проведення твердофазного ІФА, в якому антигени або антитіла
адсорбційно фіксовані на поверхні полістиролових пробірок або ж у
лунках планшет. Ці системи, які обслуговують два спеціалісти, дають
можливість аналізувати щоденно до 4000 проб.
При відсутності спеціального обладнання ІФА можна ефективно
проводити на спектрофотометрах, флуориметрах або фотоелектро-
колориметрах. Правда, при цьому дещо знижується достовірність і
продуктивність методу.
РАДІОІМУННИЙ АНАЛІЗ (РІА)
Радіоімунний аналіз (РІА) (
син.: радіоімунний метод —
РІМ)
ґрунтується на використанні антитіл або антигенів, мічених
ізотопом
125
І. У присутності гомологічних імунореагентів утворюють-
ся імунні комплекси з радіоактивною міткою, які виявляють за до-
помогою гамма-лічильника. РІА використовується для діагностики
хвороби Ауєскі, лейкозу ВРХ, лейкозу птиці та ін.
Приготування імунореагентів для РІА
У вірусологічній практиці застосовують твердофазний варіант
РІА, при якому специфічні антигени або антитіла фіксують на тве-
рдій основі: полістиролових кульках, пробірках або планшетах. Ад-
сорбцію імунореагентів проводять упродовж 18 – 24 год за кімнатної
температури, рН 6,0 – 10,0, у ФБР (рН 7,4) з додаванням 0,5 – 1 %
сироваткового альбуміну ВРХ або 10 – 20 % ембріональної сироват-
ки ВРХ. Тверду основу з адсорбованими антитілами можна зберіга-
ти 2 – 3 тижні при +4 ºС, а з вірусними антигенами — до 1 року.
Крім фіксованих на твердій основі антитіл і антигенів, для по-
становки РІА потрібно також мати імунореагенти з радіоактивною
міткою, в ролі якої виступає ізотоп
125
І. Для кон’югації антитіл або
вірусних антигенів із
125
І застосовують різні методи (перйодатний,