Лабораторные работы и задачи по биохимии, практическое пособие

Подождите немного. Документ загружается.

Норма показателя клиренса - 90-130 мл/мин.

Клиренс определяют, когда креатинин в норме, в следующих случаях :

- у потенциальных доноров почек ;

- при минимальных поражениях почек (клиренс снижается раньше,

чем повышается количество креатинина и мочевины в крови, т.е. является

самым ранним диагностическим признаком поражения почек );

- при определении дозировки токсического соединения;

- оценке функции каждой почки (результат сравнивают с половиной

клиренса)

Реабсорбцию рассчитывают по формуле :

%100

⋅

−

R .

Величина реабсорбции в норме составляет 97-99%.

Работа 16. Механизм действия адреналина. Определение

адреналина в сыворотке крови

Адреналин – гормон мозгового слоя надпочечников , синтезируется в

ответ на состояние физического или нервного стресса. Секреция его не

зависит от концентрации глюкозы в крови. Биосинтез адреналина идет по

схеме: тирозин → диоксифенилаланин (ДОФА) → дофамин → норадреналин

→ адреналин.

Адреналин и норадреналин называют катехоламинами, но

гормональной активностью обладает адреналин, а норадреналин является

нейромедиатором . Клетками-мишенями для адреналина являются клетки

скелетных мышц, печени, сердца, сердечно- сосудистой системы и жировой

ткани. Функционирует адреналин в течение 1 мин. Механизм действия -

мембранно- внутриклеточный.

Биологическое действие адреналина.

I. Влияние на углеводный обмен (прежде всего в скелетных мышцах, а

затем в печени ):

- усиливает распад глюкозы в процессе гликолиза, активируя

фосфофруктокиназу;

- усиливает глюконеогенез в печени за счет активации 4 ферментов ;

пируваткарбоксилазы , фосфоенолпируваткарбоксикиназы , фруктово-1,6-

бисфосфатазы и глюкозо-6-фосфатазы ;

- усиливает распад гликогена, активируя каскадным механизмом , через

аденилатциклазную систему, гликогенфосфорилазу;

- ингибирует биосинтез гликогена, так как через аденилатциклазную

систему инактивирует гликогенсинтазу;

В результате адреналин повышаег содержание глюкозы в крови.

П . Влияние на обмен липидов:

- усиливает распад триацилглицеролов , активируя каскадным

механизмом триацилглицерол-липазу.

- усиливает распад жирных кислот в процессе

-окисления.

- повышает содержание жирных кислот, холестерина и

фосфоглицеридов в крови.

Адреналин подавляет секрецию инсулина, повышает секрецию

глюкагона.

Катаболизм адреналина протекает в гепатоцитах печени под влиянием

ферментов моноаминооксидазы и катехол-0-метилтрансферазы с

образованием 80% ванилил-миндальной кислоты , 15% - метадреналина,

которые выделяются почками с мочой , лишь 5% адреналина выделяются с

мочой неизмененными.

Гормональные механизмы реализации стресса. Состояние физического

и эмоционального стрессов воспринимают клетки центральной нервной

системы и посылают нервные импульсы в мозговой слой надпочечников и в

гипоталамус. В мозговом слое надпочечников идет секреция адреналина, а в

гипоталамусе синтезируется кортиколиберин (кортикотропин-рилизинг -

гормон), под влиянием которого в гипофизе происходит выработка

адренокортикотропного гормона (АКТГ), воздействующего на корковый

слой надпочечников . Длительное выделение адреналина приводит к

разрастанию (утолщению) коркового слоя надпочечников и значительному

увеличению выделения кортикостероидных гормонов . Следовательно,

гормональные изменения метаболизма при стрессе обусловлены выделением

большого количества адреналина и кортикостероидных гормонов .

Патология: феохромоцитома (опухоль мозгового слоя надпочечников ).

Количественное определение адреналина колориметрическим методом

Принцип метода. Метод основан на колориметрическом определении

интенсивности синего окрашивания, возникающего при взаимодействии

адреналина с реактивом Фолина. Реактив Фолина содержит соли фосфорно-

вольфрамовой и фосфорно- молибденовой кислот, которые

восстанавливаются адреналином с образованием более низких оксидов

металлов , комплексы которых окрашены в синий цвет.

Реактивы : 0,01%-й раствор адреналина в ампулах ; реактив Фолина;

10%-й раствор углекислого натрия.

Ход работы . В две калиброванные на 10 мл пробирки вносят: в первую

— 1 мл стандартного раствора адреналина, во вторую — 1 мл исследуемого

раствора. Далее в каждую пробирку добавляют по 4 мл 10 %-го

свежеприготовленного раствора карбоната натрия и по 0,5 мл реактива

Фолина, встряхивают. Жидкость постепенно окрашивается в синий цвет,

достигающий наибольшей интенсивности через 5 мин. Далее объем

жидкости доводят до метки 10%-м раствором карбоната натрия,

перемешивают и окраску исследуемого раствора сравнивают с окраской

стандартного раствора адреналина на фотоколориметре, светофильтр

красный, кювета с толщиной слоя 5 мм.

Расчет:

Концентрация адреналина, мг =(C

ст

·Е

оп

)/Е

ст

где C

ст

- концентрация адреналина в стандартном растворе в мг, Е

ст

экстинкция стандартного раствора, E

оп

- экстинкция испытуемого раствора.

Задание по теме «Перенос генетической информации»

1. Напишите нуклеотидную последовательность участка ДНК,

синтезируемого ДНК-полимеразой , если матрицей для него была

последовательность

а) (5′) - AТ GААATTAСGТ GСACGACGCТ GA - (3′)

б) (5′) - AТ GТТAGСATATСGТ GGGCCGТ AG - (3′)

в ) (5′) - А TGAТ TААAСGТ GСATTTAATTAA- (3′)

г) (5′) - AТ GТ TTСGТ GСAAAAGCGCTTTGA - (3′).

2. Напишите нуклеотидную последовательность РНК, синтезируемой

ДНК-зависимой РНК-полимеразой , если матрицей для нее является

синтезированный участок , полученный в п. 1.

3. Напишите аминокислотную последовательность пептида, если в

качестве матрицы для его синтеза будет РНК, полученная в п .2 (см . табл. 13).

4. Молекула ДНК содержит 15 тыс. пар оснований. Рассчитайте длину

молекулы . (Расстояние между центрами оснований, лежащих друг над

другом , равно 0,34 нм . На каждый полный виток двойной спирали

приходится 10 нуклеотидных пар .)

5. Согласно данным электронной микроскопии длина хромосомы E.

coli равна 1,2 мкм . Сколько пар комплементарных оснований присутствует в

хромосоме?

Таблица 13.

Генетический код (последовательность оснований в триплетах мРНК,

кодирующих аминокислоты ).

Второе положение Первое

положение

(5’-конец)

↓

U C A G

Третье

положение

(3’-конец)

↓

Phe

Leu

Ser

Tyr

Стоп

Cys

Стоп

Trp

C Leu

Leu

Pro

His

Gln

Arg

A Ile

Ile

Met

Thr

Asn

Lys

Ser

Arg

G Val

Val

Ala

Asp

Glu

Gly

ОСНОВНАЯ ЛИТЕРАТУРА

Биологическая химия. Руководство к лабораторным занятиям . - СПб.,

1998. – 68 с.

Медицинские лабораторные технологии: Справочник : В 2 т. / Под ред .

А .И .Карпищенко. - СПб: Интермедика, 1999. - Т .2. - 115 с.

Пустовалова Л.М . Практикум по биохимии / Л.М . Пустовалова. –

Ростов -н/Д : Феникс, 1999. – 544 с.

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ЛИТЕРАТУРА

Алабовский В .В . Задания к практическим занятиям по биохимии / В .В .

Алабовский. – Воронеж , 1994. – 116 с.

Лифшиц В .М . Биохимические анализы в клинике. / В .М . Лифшиц, В .И .

Сидельникова. - Воронеж : Изд-во Воронеж . ун-та, 1995. - 222 с.

Энциклопедия клинических лабораторных тестов / Под ред . Н . Тица. -

М .: Лабинформ , 1997. - 942 с.

Ленинджер А . Основы биохимии: В 3 т. / А . Ленинджер . - М .: Мир,

1985. – Т . 1-3.

Составители : Попова Татьяна Николаевна,

Матасова Лариса Владимировна,

Текунова Нина Алексеевна

Семенихина Анастасия Владимировна

Редактор Тихомирова О .А.