Рубин А.Б. Современные методы биофизических исследований (Практикум по биофизике)

Подождите немного. Документ загружается.

Q 0

уу

Рис.

101.

Линия поглоще-

ния

(А) и ее

первая произ-

водная

(5) при

анизотро-

пии

g-фактора

Рис.

102.

Сигнал

ЭПР при раз-

личных скоростях взаимного

пре-

вращения

двух

форм

{А и В)

свободного радикала (остальные

объяснения

см. в

тексте)

ном

поле. Значения g

, g,

, g

. для поликристаллических образ-

цов определяют по характерным точкам спектра ЭПР (рис. 101).

В растворах анизотропия g-фактора частично усредняется вслед-

ствие интенсивного движения молекул, что вызывает некоторое су-

жение линии ЭПР-поглощения по сравнению с твердыми образцами.

Однако для больших молекул анизотропия g -фактора может наб-

людаться и в растворе.

Динамические

механизмы

уширения

линий. Уширение линий в

результате диполь-дипольных взаимодействий и анизотропии g-

фактора наблюдается в основном в твердых

телах.

В жидкостях про-

является еще целый ряд эффектов, имеющих динамический характер

приводящих к уширению линий.

Так,

в растворах часто наблюдается уширение линий, связанное

с протекающими в системе химическими реакциями. Пусть исследуе-

мая система содержит радикал, который

существует

двух

различ-

ных формах А к В, обладающих собственным сигналом ЭПР. При

малой скорости взаимного превращения этих

двух

форм радикала в

суммарном спектре

будут

наблюдаться две линии, отвечающие фор-

мам Л и В (рис.102). Увеличение скорости взаимного превращения

будет

приводить к уширению линий, поскольку при этом умень-

шается время жизни радикала в данной форме. Зависимость шири-

ны

линии от времени выражается соотношением

АЯ

набл

= ДЯ

+П/(2т7с)1,

где

АЯ

набл

и ДН

— наблюдаемая ширина линии и

ширина

линии в отсутствие обмена, т — среднее время жизни ра-

дикала в форме А или В.

241

При

увеличении скорости взаимных превращений линии, уши-

ряясь,

начинают дополнительно сближаться и сливаются. Это

происходит по той причине, что при высокой скорости взаимных пре-

вращений невозможно различить сигналы радикала в отдельных

состояниях А и В. В спектре ЭПР наблюдается только одна линия

при

усредненном по времени значении резонансного поля.

Одним из достоинств метода ЭПР при изучении химических про-

цессов является возможность наблюдать взаимодействия химически

идентичных частиц. Примером такой реакции может служить пере-

нос

электрона

между

анион-радикалом и нейтральной молекулой

нафталина:

СюН7тС

з±С

+С

Наблюдаемое уширение линий в спектре анион-радикала связано с

уменьшением времени жизни электрона при переносе электрона

между

радикалом и нейтральной молекулой.

Еще одной причиной уширения линий является

электронный

спиновый

обмен:

сталкиваясь, радикалы

могут

обмениваться свои-

ми

спиновыми состояниями. Так, если до столкновения в первом ра-

дикале магнитный момент неспаренного электрона был ориентиро-

ван по полю, а во втором — против поля, то после столкновения ори-

ентации магнитных моментов неспаренных электронов у каждого из

радикалов меняются на противоположные. Такой процесс приводит

уменьшению жизни неспаренного электрона в данном спиновом

состоянии,

что и вызывает уширение линий.

Скорость спинового обмена возрастает с увеличением концентра-

ции

радикала, в силу

чего

с увеличением концентрации изменяется

ширина линии: ЛЯ -- Кс.

Уширение, обусловленное спиновым обменом, наблюдается не

только при взаимодействии радикалов

друг

другом,

но и при вза-

имодействии радикалов с другими парамагнетиками. Например, хо-

рошо известно, что молекулярный кислород, являясь парамагне-

тиком,

вызывает дополнительное уширение линий, что приводит к

смазыванию

структуры

сигнала.

уширению сигналов ЭПР свободных радикалов приводит при-

сутствие

в системе парамагнитных ионов металлов. К уширению

линий

может приводит еще ряд динамических процессов, например

зависящее от времени взаимодействие магнитных моментов элект-

ронов с магнитными моментами ядер, протонный обмен с растворите-

лем и

другое.

Все эти процессы вносят вклад в величину обсуждав-

шегося выше времени Т.,, приводя к уширению линий в спектрах

ЭПР.

Сверхтонкая

структура

спектров

ЭПР. При обсуждении

принципа

ЭПР было показано, что на неспаренный электрон дейст-

вует

эффективное магнитное поле, являющееся суммой внешнего

магнитного поля и внутреннего локального поля. Одним из источ-

ников

внутренних локальных полей

служат

ядра многих элемен-

242

Рис.

103.

Сверхтонкое взаимодей-

ствие магнитного момента неспа-

ренного электрона

протоном

(/=1/2)

Длинными

стрелками показаны пере-

ходы между уровнями: мелкими — ори-

ентация

магнитного момента протона

относительно внешнего поля

VW-

Рис.

104.

Сверхтонкое взаимодейст-

вие магнитного момента неспаренно-

го электрона

двумя эквивалентны-

ми

протонами

Длинными

стрелками показаны переходы

между уровнями; мелкими — ориентация

магнитных моментов протонов относи-

тельно внешнего поля

тов. Например, протоны, ядра дейтерия, азота JV

углерода

др. Взаимодействие магнитных моментов неспаренных электронов

с магнитными моментами ядер —

сверхтонкое

взаимодействие

—

приводит к расщеплению линий и появлению сверхтонкой

структуры

спектрах ЭПР.

Рассмотрим в качестве примера радикал, в котором неспарен-

ный

электрон взаимодействует с одним протоном. Неспаренный элек-

трон находится в суммарном магнитном поле: внешнем и создавае-

мом протоном. При рассмотрении спектра ЭПР такого радикала не-

обходимо учитывать тот факт, что магнитный момент протона также

ориентируется во внешнем магнитном поле. Ядерный спин протона ра-

вен / = 1/2. Это означает, что магнитное квантовое число М/ про-

тона имеет значения ±1/2, а значит, магнитный момент протона мо-

жет быть ориентирован параллельно или антипараллельно по от-

ношению к внешнему магнитному полю. Это приводит к

тому,

что

для одних радикалов //.,

фф

= Н 4- Я

Л()К

, а для

других

эфф

•=--

— #

ок- В силу этого в спектре ЭПР рассматриваемого ра-

дикала

будут

наблюдаться две линии (рис. 103) при

двух

значениях

внешнего магнитного поля:

/У

рр

= И„ ± а/2 = Н

— а/И/, где

а --- константа сверхтонкого расщепления, равная расстоянию меж-

ду

двумя

линиями СТС; Н„ — резонансное поле при а --- 0, т.е.

при

отсутствии сверхтонкого взаимодействия.

Схема энергетических уровней неспаренного электрона, взаимо-

действующего

с одним протоном, показана на рис. 103. Локальное

поле, создаваемое протоном, расщепляет каждый из исходных уров-

243

ней

на два. Обозначенные переходы происходят при условии, что

AMs = 1, AM/ = 0, где А означает изменение соответствующего

квантового магнитного числа.

Если неспаренный электрон взаимодействует более чем с одним

протоном, то картина СТС усложняется. Например, при взаимодей-

ствии с двумя эквивалентными протонами (неспаренный электрон

взаимодействует с ними в одинаковой степени) в спектре ЭПР бу-

дут наблюдаться три линии (рис. 104). Действительно, магнитные мо-

менты

двух

протонов

могут

быть ориентированы относительно внеш-

него поля тремя способами: оба по полю (состояние /), оба против

поля

(состояние 2) и один по полю, другой против поля (состояние 3).

Состояния

/ и 2, когда оба магнитных момента ориентированы

по

полю или против поля, как видно из рис. 104,

могут

быть реализо-

ваны только одним способом. В то же время состояние 3, когда один

из

магнитных моментов ориентирован по полю, а другой — против

поля,

реализуется двумя способами. Это означает, что число ради-

калов в состоянии 3 вдвое больше числа радикалов состояниях / и 2.

В силу этого обсуждаемый спектр состоит и

трех

линий с соотноше-

нием

интенсивностей

1:2:1.

При

увеличении числа протонов, с которыми может взаимодейст-

вовать неспаренный электрон, спектр

будет

содержать еще больше

линий.

Например, в

случае

трех

эквивалентных протонов спектр со-

стоит из четырех линий с соотношением интенсивностей

1:3.3:1.

случае

п эквивалентных протонов в спектре ЭПР

будут

наблюдать-

ся

п + 1 линий. Помимо протонов к сверхтонкому расщеплению

спектра ЭПР приводит взаимодействие с другими ядрами.

В общем

случае

если в радикале содержится п эквивалентных

ядер, обладающих ядерным спином (/), то число компонентов сверх-

тонкой

структуры Nстс = 2л/ + 1.

Например,

одно взаимодействие неспаренного электрона с ядром

азота N

, имеющим / = 1, приведет к появлению в спектре ЭПР

трех

линий.

Картина

сверхтонкого расщепления спектров усложняется, ког-

да в радикале присутствует несколько групп неэквивалентных ядер.

В этом

случае

неспаренный электрон ваимодействует с одними яд-

рами в большей степени, чем с другими. Более сильное взаимодей-

ствие приводит к расщеплению спектра на компоненты, каждый из

которых

будет

дополнительно расщепляться за счет более слабого

взаимодействия с другими ядрами. Общее число линий в спектре при

наличии

неэквивалентных ядер

будет

ic = П (2/я; + 1).

Сложности в интерпретации таких спектров возникают не толь-

ко

из-за большого числа линий, но и в связи с наложением линий

суммарном спектре, что вызывает трудности в отнесении отдельных

линий

к взаимодействиям электронов с определенными ядрами (или

группами ядер).

Природа

сверхтонкого

взаимодействия.

Взаимодействие магнит-

ных моментов ядер и электронов можно представить как рассмотрен-

244

ное выше диполь-дипольное взаимодействие. В этом

случае

локаль-

ное магнитное поле, создаваемое ядром в точке нахождения неспа-

ренного электрона,

будет

зависать от ориентации:

лок

= \i

X [(3

cos

— 1)//?

1, где R — расстояние

между

ядром и электроном,

цл/

— проекция ядерного магнитного момента на направление внеш-

него магнитного поля, 0 —

угол

между

внешним магнитным полем

линией, соединяющей ядро и электрон.

Так

как Я

лок

зависит от

угла

6, то и сверхтонкое взаимодействие

ядра и электрона в этом

случае

будет

зависеть от этого

угла.

Такое

сверхтонкое взаимодействие называется

анизотропным.

При ани-

зотропном сверхтонком ваимодействии наблюдается анизотропное

сверхтонкое расщепление спектра ЭПР; константа сверхтонкого рас-

щепления

а изменяется в зависимости от

угла

Подобные эффекты особенно заметны, если парамагнитные части-

цы

находятся в монокристаллах, которые определенным образом

ориентированы относительно внешнего поля. В поликристалличес-

ких или аморфных образцах, где

угол

8 изменяется в пределах от

О до я, суммарный спектр представляет собой огибающую многих

спектров с различной величиной расщепления.

Анизотропия СТС, подобно анизотропии g-фактора. является од-

ной

из причин уширения линий. В биологических системах эффект

анизотропии

СТС часто проявляется в тех

случаях,

когда движение

парамагнитрых частиц существенно заторможено, например в тка-

нях, замороженных или лиофильно высушенных образцах. Если бы

сверхтонкое взаимодействие электронов с ядрами имело только ани-

зотропный характер, то в растворах малой вязкости или при локали-

зации

неспаренного электрона на s-орбитали не наблюдалось бы

сверхтонкого расщепления спектров. В этих

случаях

происходит

эффективное

усреднение анизотропного взаимодействия до нуля

оно не может служить причиной расщепления спектров ЭПР.

Однако в спектре ЭПР атомарного водорода, где электрон лока-

лизован на сферической s-орбитали, наблыдается расщепление ли-

ний,

обусловленное сверхтонким взаимодействием. Точно так же в

растворах малой вязкости, когда анизотропные взаимодействия ус-

редняются до нуля за

счет

быстрого движения парамагнитных ча-

стиц,

например в спектрах свободных радикалов, проявляется хо-

рошо выраженная СТС. Причиной этого является изотропное

сверх-

тонкое взаимодействие. Изотропное взаимодействие проявляется в

том случае, когда

существует

конечная вероятность нахождения

электрона в точке, где расположено ядро. Таким свойством

обладают

только электроны на сферически-симметричных

s-орбиталях.

Энер-

гия изотропного взаимодействия

ияп

(—8л/3),

, где

t|5

—

значение волновой функции электрона в точке расположения ядра.

Таким

образом, можно предположить, что изотропная СТС

будет

наблюдаться только в тех

случаях,

когда неспаренный электрон на-

ходится на s-орбитали. Между тем эксперименты

свидетельствуют

том, что изотропная СТС наблюдается и

тогда,

когда неспаренный

245

электрон локализован на атомной р-орбитали или молекулярной

л-орбитали атомов

углерода,

как, например, в метильном радикале

(СН

или анион-радикале бензола С

. Для р- и я-орбиталей уг-

лерода электронная плотность в точке ядра равна нулю.

Причиной

появления изотропной СТС в я -радикалах является

поляризация

спина.

Рассмотрим, например, фрагмент С — Н- с

неспаренным электроном на р-орбитали

углерода.

На рис. 105 пока-

заны

два возможных спиновых состояния фрагмента jC — Н. Вли-

яние

р-электрона на о-связь атомов

углерода

и водорода приводит к

тому,

что более вероятным является состояние //. Таким образом,

появляется некоторая спиновая плотность (или плотность неспарен-

ного электрона) на ls-орбитали атома водорода. В свою очередь, это

приводит к появлению изотропной СТС. Величина сверхтонкого рас-

Н-

щеиления

в фрагменте "С -

определяется соотношением а

Qpc- где и

- константа сверхтонкого ваимодействия на прото-

не;

Q —константа Мак-Коннела, причем \Q\ -- (2-^3)-10~

Тл;

(;

—плотность неспаренногоэлектрона на атоме

углерода,

связан-

ном

с данным протоном.

Сверхтонкое ваимодействие неспаренного электрона, локализо-

ванного на атоме

углерода,

наблюдается и для фрагмента ^С —

СН

Расщепление, обусловленное протонами СН

-группы, объ-

ясняется

сверхсопряжением.

Сверхсопряжение возникает в

результа-

те прямого пространственного перекрывания электронных орбита-

лей протонов CH

-группы с р-орбиталью атома

углерода,

на кото-

рой находится неспаренный электрон. Вследствие этого и возникает

сверхтонкое взаимодействие неспаренного электрона с протонами

CHs-группы. СТС спектров является важной информативной харак-

теристикой спектров ЭПР. поскольку по картине сверхтонкого рас-

щэпления

спектров ЭПР оказывается возможным идентифицировать

химическую природу парамагнит-

ных частиц, получить важные дан-

ные об электронной

структуре

па-

рамагнитной частицы. Исследова-

ние

анизотропии СТС помогает вы-

яснить

как

«геометрию»

самой па-

рамагнитной частицы, так и харак-

тер встраивания этих частиц в раз-

личные матрицы. СТС спектров за-

висит от интенсивности и характе-

ра движения парамагнитных час-

тиц,

что позволяет проводить ис-

следования методом ЭПР молеку-

лярной

динамики.

Рис.

105. Спиновые состояния (/.

//) фрагмента — С—Н (объясне-

ния

см. в тексте)

246

Рис.

106. Сигналы ЭПР печени (1), серд-

ца

(2) и

бурого

жира хомяков (3) при

температуре

—196°С

Применение

ЭПР в

биоло-

гии. Метод ЭПР начал при-

меняться

в биологических ис-

следованиях в 50-е годы. Бла-

годаря довольно высокой чув-

ствительности и возможности

определении природы пара-

магнитных частиц этот метод

нашел

широкое применение

для изучения целого ряда

биологических процессов.

Первоначально

биологиче-

ские

эксперименты проводили

лиофильно высушенными

или

замороженными образца-

ми.

Это было вызвано тем,

что большое содержание жид-

кой

воды в образцах приво-

дило к сильному падению

чувствительности радиоспект-

рометра. По мере развития

техники ЭПР был создан це-

лый

ряд высокочувствитель-

ных спектрометров, что поз-

воляет проводить исследования и на водосодержащих образцах.

Сигналы

ЭПР различных растительных и животных тканей были

обнаружены в самых первых экспериментах. Парамагнитными цент-

рами,

ответственными за сигналы ЭПР тканей, являются свободные

радикалы и целый ряд парамагнитных металлов. Дальнейшими ис-

следованиями было установлено, что содержание свободных радика-

лов в различных тканях изменяется в пределах 10

— 10

на 1 г

сухой

массы.

Сигналы

ЭПР различных тканей представляют собой несколько

асимметричный

синглет cg-фактором

2,003—2,005

и шириной

между

точками максимального наклона

АЯ

тах

= 1-^2 мТл. Сигнал имеет

слабовыраженную СТС. Свободнорадикальные сигналы ЭПР тка-

ней

представлены на рис. 106.

Вид спектра, в особенности

отсутствие

хорошо разрешенной СТС,

не

позволяет сделать вывода о природе свободнорадикального сиг-

нала

тканей. Существующие в настоящее время данные указывают

на

то, что этот сигнал может быть обусловлен целым рядом свободно-

радикальных продуктов, такими, как семихинонные формы

коэн-

зима

Q, монодегидроаскорбиновой кислоты. Вклад в этот сигнал мо-

гут вносить и

другие

соединения: витамины, гормоны, флавины и др.

Однако

окончательного заключения о природе свободнорадикаль-

ного сигнала тканей в настоящее время еще не сделано,

хотя

вопрос

природе указанных сигналов представляет не только теоретичес-

247

кий,

но и практический интерес

(существует

обширный экспери-

ментальный материал о связи сигналов ЭПР тканей с метаболиз-

мом и патологическими состояниями клеток и тканей).

Помимо

сигналов свободных радикалов в тканях наблюдается

целый ряд сигналов металлов (Fe, Cu, Mn, Ni, Co). Эти металлы вхо-

дят в состав металлопротеинов. принимающих

участие

в целом ряде

ферментативных процессов. Железосодержащие белки (цитохромы,

ферредоксины) являются компонентами электрон-транспортных це-

пей

в митохондриях и хлоропластах. Цитохром

450

принимает уча-

стие в микросомальном окислении. Широко распространены медь-

содержащие ферменты.

Комплексы

металлов

обладают

гораздо более широкими сигнала-

ми,

чем сигналы свободных радикалов, за

счет

сильного спин-орби-

тального взаимодействия, что приводит к коротким временам

спин-

решеточной релаксации, анизотропии g-фактора и сверхтонкого

взаимодействия, отличиям значения g -фактора от g-фактора свобод-

ных радикалов. Кроме того, в связи с короткими 7\ сигналы многих

металлокомплексов не

удается

наблюдать при комнатной темпера-

туре.

Для исследования этих металлокомплексов применяют

охлаж-

дение образцов до температур, близких к температурам жидкого ге-

лия.

Предположение о том, что сигнал ЭПР тканей связан с фермента-

тивными реакциями, привело к развитию исследований методом

ЭПР.

Свободнорадикальные интермедиаты ферментативных реакций являются

короткоживущими продуктами.

Для

изучения ферментативных реакций были

разработаны специальные экспериментальные подходы.

проточных систе-

мах фермент

субстрат

быстро смешиваются,

затем смесь прокачивается

через специальную кювету, помещенную

резонаторе ЭПР. Если скорость

по-

тока через кювету постоянна,

то

радиоспектрометр

ЭПР

будет

регистрировать

сигнал

ЭПР,

отражающий стационарную концентрацию радикалов, устано-

вившуюся

потоке. Поскольку концентрация радикалов

кювете постоянна,

это позволяет надежно зарегистрировать

и в

дальнейшем проанализировать

сигнал ЭПР. Если

какой-то момент времени остановить проток через кюве-

ту,

то в

этом режиме

удается

наблюдать

кинетику исчезновения промежуточ-

ного продукта ферментативной реакции.

Другой

метод, позволяющий регистрировать сигналы ЭПР корот-

коживущих радикалов, называется

методом

матричной

изоляции.

Он

основан на том, что из реакционной смеси через определенные

промежутки времени после начала реакции отбирают пробы, кото-

рые быстро замораживают. Сигнал ЭПР замороженных образцов

отражает состояние в исследуемой системе в момент взятия пробы.

Методом ЭПРбыл исследован целый ряд ферментативных систем:

обнаружены свободнорадикальные продукты субстратов; в ряде слу-

чаев оказалось возможным наблюдать за оксилительно-восстанови-

тельными превращениями ионов металлов, входящих в активный

центр фермента.

248

Рис.

107. Сигнал II (а) и сигнал I (б) зеленых растений

Метод ЭПР широко применяют в исследованиях фотосинтеза:

изучается механизм первичных стадий разделения зарядов в реак-

ционных

центрах и дальнейший перенос электрона по цепи элект-

ронного транспорта. На сегодня

существует

большое количество

экспериментальных данных в этой области. Вот некоторые из них.

В листьях и хлоропластах высших растений при комнатной тем-

пературе наблюдается два сигнала ЭПР: сигнал I и сигнал II (рис.

107). Сигнал II

обладает

слабовыраженной СТС, его ширина равна

1,6 мТл, g-фактор —

2,0045.

Этот сигнал регистрируется и в темно-

те, несколько возрастает при освещении и медленно

затухает

после

выключения света. Сигнал II исчезает при различных повреждени-

ях фотосистемы II

(ФСП),

отсутствует

у мутантов, не обладающих

ФС

II. Эти и ряд

других

данных показывают, что сигнал II ассоции-

рован с водоразлагающей системой высших растений — ФС II.

Природу этого сигнала исследовали во многих

работах.

В настоя-

щее время считают, что он обусловлен семихинонной формой

пластохинона. Импульсное освещение хлоропластов позволило вы-

явить быстрые компоненты в кинетике этого сигнала и связать эти

быстрые кинетические изменения сигнала с функционированием

пластохинона в системе фоторазложения воды. При освещении ли-

стьев и хлоропластов наблюдается узкий (ДЯ

П1ах

0,7ч-0,8

мТл,

g —

2,0025)

бесструктурный фотоиндуцированный сигнал, назван-

ный

сигналом I. Этот сигнал относится к катионрадикальной

форме пигмента Р

1П0

— реакционного центра ФС I. Сигнал I

наблюдается только на

свету

и быстро исчезает после вы-

ключения света.

249

Помимо

сигналов I и II в препаратах зеленых растений обнару-

жен еще целый ряд сигналов комплексов металлов, принимающих

участие

в первичных фотореакциях. Для наблюдения этих сигналов

применяют сверхнизкие температуры, так как при комнатной темпе-

ратуре

сигналы ЭПР металлокомплексов сильно уширены. К таким

металлокомплексам относятся комплексы Fe, выполняющие роль ак-

цепторов электрона в ФС I. В фотосистеме II в качестве одного из

участников реакции разделения зарядов функционирует комплекс,

состав которого

входят

железо и хинон; исследуются комплексы

Мп,

принимающие непосредственное

участие

в разложении воды.

ЭПР

применяют для изучения целого ряда

других

процессов,

протекающих с участием свободных радикалов, например при пора-

жении биологических объектов ультрафиолетовой и ионизирующей

радиацией.

Для улавливания короткоживущих радикальных продуктов при-

меняют замораживание объекта, поскольку при низких

температурах

затормаживаются вторичные реакции расходования первичных сво-

бодных радикалов. Для исследования короткоживущих продуктов

относительно недавно разработан еще один метод, называемый ме-

тодом

спиновых

ловушек.

Суть этого метода заключается

в том, что в

исследуемую

систему вводят

вещества, взаимодействуя

которыми короткоживущие радикалы

образуют

более стабильные долгоживущие радикальные комплексы. Анализ спектров

ЭПР

этих стабильных

аддуктов

позволяет

судить

природе короткоживущих

радикалов, захваченных ловушкой.

Помимо

изучения механизмов реакций, протекающих с участием

парамагнитных частиц, метод ЭПР широко используют и для иссле-

дования структурно-динамических свойств макромолекул и биомем-

бран.

Для этих целей разработан метод спиновых зондов и меток.

Суть метода заключается

в том, что в

исследуемую

систему вводят

ста-

бильный

радикал, который либо ковалентно связывается

макромолекулой

(спиновая

метка), либо удерживается

системе

за

счет физических взаимо-

действий (спиновый зонд). Спектр

ЭПР

этого стабильного радикала

чувст-

вителен

свойствам среды,

которую

он

внедрен. Разработанные теоретиче-

ские

подходы позволяют связать параметры спектра

ЭПР

радикала

парамет-

рами,

характеризующими физические свойства системы: характером

и ско-

ростями

движения молекул, конформационными изменениями структуры

макромолекул

и т. д.

В качестве спиновых зондов в основном используют

нитроксиль-

н,с

ные

радикалы.

Эти радикалы содержат группировку

на

которой локализован неспаренный электрон. Стабильность нит-

250