При определении антибиотических свойств микроорганизмов,
культивируемых в жидких средах, необходимо иметь в виду, что некоторые
антибиотики в процессе развития микробов накапливаются внутри клеток
продуцента, практически не выделяясь в окружающую среду. Поэтому
определение антибиотических свойств организмов следует проводить как в
культуральной жидкости, так и в экстрактах. Обычно для экстракции
антибиотика из клеток продуцента применяют органические растворители
(этиловый спирт, подкисленный этиловый спирт, ацетон и другие вещества).
Для оценки антибиотических свойств микроорганизмов, выросших в
жидких средах, можно использовать метод последовательных разведении и
метод бумажных дисков.
Метод бумажных дисков. На агаровую пластинку в чашке Петри
высевают соответствующий тест-организм. Затем чашки с засеянным тест-
микробом подсушивают в термостате при 37 °С в течение 15-20 мин. На
одной чашке, т.е. в отношении одного тест-организма, может быть испытано
одновременно 6-7 культуральных жидкостей.
Диски из фильтровальной бумаги диаметром 8 мм заготавливают
впрок, стерилизуют в автоклаве под давлением выше нормального на одну
атмосферу в течение 20-30 мин.
Стерильный диск фильтровальной бумаги захватывают стерильным
пинцетом и смачивают в испытуемой культуральной жидкости, затем
накладывают на поверхность питательного агара, засеянного тест-микробом.
Чашку с тест-организмом и бумажными дисками помещают в термостат при
температуре, оптимальной для роста тест-организма, на 24 ч, если это
бактериальные формы тест-микроба, и на 48-72 ч для грибных или
дрожжеподобных форм.
При наличии антибиотического вещества в испытуемой культуральной
жидкости вокруг диска образуется зона задержки роста тест-микроба.
Приведенные методы пригодны для определения антибиотической
активности микроорганизмов только в отношении бактерии, актиномицетов,
дрожжевых и дрожжеподобных организмов и грибов. Для выяснения
антивирусного или антиопухолевого действия организмов в силу
специфичности этих объектов используют другие методы, описанные в
разделах 1.7.3, 1.7.4.
1.7.3 Определение антивирусного действия антибиотиков
Вирусы – внутриклеточные паразиты и поэтому не могут развиваться в
виде «чистой культуры» вне клеток своего хозяина. Это обстоятельство и
заставляет применять другие методы первоначального отбора активных
веществ, отвечающие особенностям развития вирусов.
Метод тканевых культур. Существует несколько вариантов метода
тканевых культур, но наиболее удобен метод использования переживающих
кусочков хорион-аллантоисной ткани куриного эмбриона в модификации
Тама, Фалкерса и Хорсфолла (1953).