Сухую агаризованную питательную среду растворяют и автоклавируют
в соответствии с инструкцией изготовителя. После автоклавирования колбы с
питательной средой помещают на водяную баню при 48-50 С, где
выдерживают до достижения указанной температуры, после чего в них
асептически вносят рабочие растворы антибиотиков (1 часть рабочего
раствора АБП на 9 частей расплавленного агара) и, при необходимости,
термолабильные питательные добавки. Затем среду тщательно
перемешивают и разливают по чашкам Петри, толщина слоя питательной
среды должна быть 3-4 мм.
Вторым способом приготовления чашек Петри с агаром, содержащим
разведения АБП, является смешивание питательной среды и раствора АБП
непосредственно в чашке Петри. Для приготовления стандартных
пластиковых чашек диаметром 90 мм необходимо к 2 мл раствора АБП
добавить 18 мл разогретого до 50 С жидкого агара. Чашки предварительно
маркируют с указанием препарата и его концентрации. Очень важно
тщательно перемешивать агар до того, как он начнёт застывать для
равномерного распределения АБП по всей толще питательной среды.
Перемешивание производят на горизонтальной поверхности последовательно
плавными разнонаправленными круговыми движениями чашки. После
приготовления чашек агар должен затвердеть в горизонтальном положении.
Нельзя резко передвигать, переносить чашки до полного застывания агара.
Параллельно с чашками Петри, содержащими растворы антибиотиков,
для контроля роста готовят чашки Петри без антибиотиков. Чашки оставляют
при комнатной температуре для застывания и подсушивания на 10-12 ч.
Приготовленные указанным образом чашки Петри предпочтительнее
использовать немедленно, однако допускается хранение в запаянных
полиэтиленовых пакетах при 4-8 С в течение 5 сут. При этом необходимо
иметь в виду, что некоторые бета-лактамные антибиотики (прежде всего,
ампициллин, цефаклор, имипенем), особенно при низких концентрациях не
выдерживают даже указанный срок хранения. В этой связи стабильность
антибиотиков в приготовленных в лаборатории чашках Петри целесообразно
устанавливать экспериментально с использованием референтных штаммов.
Приготовление инокулюма и инокуляция.
Конечная посевная доза исследуемого микроорганизма на поверхности
питательной среды должна составлять 10
4
КОЕ. Поскольку коммерческие
инокуляторы или стандартная бактериологическая петля диаметром 3,0 мм
переносят 1-2 мкл жидкости, концентрация микроорганизмов в исходной
суспензии должна быть 10
7
КОЕ/мл. Такую концентрацию можно получить
при разведении стандартной микробной суспензии, соответствующей
стандарту 0,5 по МакФарланду, в 10 раз. Полученную суспензию необходимо
инокулировать на поверхность агара в течение 15 мин после приготовления,
при этом образуется пятно диаметром 5-8 мм.
Для контроля качества приготовления суспензий периодически
рекомендуется проводить подсчет реальных колониеобразующих единиц