(разведение 1:100). Затем 1 мл раствора разведения 1:100 смешивают с 1, 2, 3,
4, 5, 6 и 7 мл бульона в результате получая разведения 1:200, 1:300, 1:400,
1:500, 1:600; 1:700 и 1:800. Для дальнейшего увеличения разведения
испытуемого антибиотика, последовательно отличающегося на 100, берут 0,5
мл раствора с разведением 1:100, смешивают с 4, 4,5, 5 и 5,5 мл бульона и
получают разведения 1:900, 1:1000, 1:1100 и 1:1200. При желании можно
данный ряд разведения увеличить до необходимого значения. Иногда
используют и другие ряды разведении, например 1:10, 1:20, 1:40, 1:80, 1:160
и т. д. или 1:2, 1:4, 1:8, 1:16; 1:32 и т.д.
В полученном ряду разведений антибиотического вещества в каждую
пробирку вносят определенное количество клеток тест-микроба. Затем
пробирки помещают в термостат на 20-24 ч при температуре, оптимальной
для роста тест-микроба. После этого в пробирках определяется наличие или
отсутствие роста тест-организма.
Допустим, что в нашем случае развитие организма начинается при
разведении 1:1100 и далее, а во всех предыдущих разведениях, кончая
1:1000, рост тест-микроба отсутствует. Это означает, что в испытуемом
растворе содержится 1000 ед. разведения антибиотика. Или для более
точного расчета берут среднее значение максимального разведения, при
котором отсутствует развитие тест-организма, и минимальное разведение,
при котором начинается его развитие.
Методом последовательных разведений можно определить количество
антибиотика не только в условных единицах разведения, но и в весовых или
стандартных единицах. Для этой цели титрование (разведение) должно
проводиться стандартным раствором данного антибиотика, имеющего
известную активность, выраженную в мкг/мг или в ед/мг препарата.
Например, необходимо определить концентрацию стрептомицина,
содержащуюся в культуральной жидкости Str.griseus. Делают ряд разведений
культуральной жидкости, освобожденной от мицелия, а параллельно таким
же способом делают разведение стандартного раствора стрептомицина,
содержащего, например, 10 мкг/мл.
Разведение испытуемой жидкости и разведение стандартного раствора
антибиотика необходимо проводить в бульоне с фосфатным буфером при рН
7,8-8,0.
Пример расчета приведен в таблице 6.
Таблица 6 – Определение концентрации стрептомицина методом
последовательных разведений
Объект
исследовани
я
Номер пробирки
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Разведение
1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048 1:4096
Стандарт (10
мкг/мл)
- - - - - + + + + + + +
Испытуемый - - - - - - - - - - + +