Агар разливают по чашкам слоем толщиной 4 мм (на чашку диаметром
100 мм требуется 25 мл агара, на чашку диаметром 90 мм – 20 мл). Чашки
оставляют при комнатной температуре для застывания. Приготовленные
указанным образом чашки Петри предпочтительнее использовать
немедленно. Допускается хранение в запаянных полиэтиленовых пакетах в
холодильнике при 4-8 С в течение 5 суток.
3.1.1.2 Приготовление суспензии исследуемых микроорганизмов
(инокулюма)
Общим и принципиально важным для всех методов тестирования
является стандартизация суспензии исследуемого микроорганизма, ее
концентрация должна составлять 1,5 10 КОЕ/мл. Практически наиболее
приемлемым методом оценки концентрации бактериальной суспензии
является измерение ее оптической плотности. Оптическая плотность
бактериальной суспензии с концентрацией 1,5 10
8
КОЕ/мл при визуальном
контроле соответствует стандарту мутности 0,5 по МакФарланду. Контроль
оптической плотности суспензии можно также осуществлять
спектрофотометрически (денситометрически). Существуют коммерчески
доступные стандарты мутности и спектрофотометры. Бактериальную
суспензию можно готовить либо из бульонной, либо из агаровой культуры.
Приготовление инокулюма из агаровой культуры. Для приготовления
инокулюма используют чистую суточную культуру микроорганизмов,
выросших на плотных питательных средах. Отбирают несколько
однотипных, четко изолированных колоний, выросших на неселективных
плотных питательных средах. Петлей переносят незначительное количество
материала с верхушек колоний в пробирку со стерильным физиологическим
раствором или питательным бульоном, доводя плотность инокулюма точно
до 0,5 по стандарту МакФарланда. Инокулюм следует использовать в
течение 15 минут после приготовления.
Приготовление инокулюма из бульонной культуры. При определении
чувствительности быстро растущих бактерий с обычными питательными
потребностями для приготовления инокулюма также можно использовать 5-6
часовую бульонную культуру микроорганизма. Для этого отбирают
несколько однотипных изолированных колоний, петлей переносят
незначительное количество материала в пробирку с 4,0-5,0 мл жидкой
неселективной питательной среды. Инкубируют при 35 С. Примерно через
5-6 ч инкубации плотность микробной суспензии приблизительно
соответствует необходимой, и ее точно доводят до 0,5 по МакФарланду
путем добавления стерильного бульона или физиологического раствора.
Стандарт МакФарланда может быть либо приобретен, либо
приготовлен в лаборатории.
Приготовление стандарта 0,5 по МакФарланду. К 0,5 мл раствора
BaCl
2
в концентрации 0,048 моль/л (1,175 % раствор BaCl
2
2 H
2
O)