Наличие в среде ароматических аминокислот снимает биологическую
активность антибиотика азасерина по отношению к Е.coli.
Плотность используемой культуры тест-организма должна быть
постоянной для каждой серии опытов, ибо с повышением плотности клеток
тест-культуры уменьшается величина зоны задержки ее роста, бактерии
заметно влияют на процесс диффузии антибиотика ввиду того, что
антибиотические вещества в определенной мере связываются этими
организмами.
Применение в опытах постоянной плотности вегетативных микробных
клеток и спор тест-организма в агаровой среде дает возможность получать
зоны угнетения роста используемой тест-культуры соответствующей
величины с резко очерченными краями.
Чаще всего для определения плотности микробных клеток и спор
бактерий используют фотоэлектрокалориметр или стеклянный оптический
стандарт, выпускаемый Государственным контрольным институтом им. Л.А.
Тарасевича (ГКИ); стандарты соответствуют 5, 9, 10 и 11 единицам
мутности. В качестве единицы мутности условно принята мутность взвеси
тифозных бактерий, содержащая 100 млн. микробных тел в 1 мл. Однако при
определении биологической активности антибиотиков в качестве тест-
организмов чаще всего используют другие микробы, величина числового
эквивалента мутности которых обычно не соответствует величине числового
эквивалента мутности тифозных бактерий.
Разработаны соответствующие поправки, которые необходимо вносить
при использовании взвеси спор тест-организмов в процессе определения
биологической активности антибиотиков. Поправки по отношению к
числовому эквиваленту мутности для взвесей тифозных бактерий
следующие:
Споры L2 (типа B.subtilis) .......................1/12
Споры В.mycoides ....................................1/6
Споры В.mycoides (гладкий вариант) .….1/5
Зная эти поправки, можно рассчитать число спор в 1 мл суспензии.
Так допустим, что плотность взвеси спор Вас. subtilis соответствует 5
единицам мутности стандарта ГКИ. Зная, что числовой эквивалент указанной
мутности для взвесей тифозных бактерий составляет 100 млн/мл × 5 = 500
млн/мл и что соответствующий эквивалент для взвесей спор В.subtilis в 12
раз меньше, находим, что концентрация спор в исследуемой суспензии равна
500 млн/мл / 12 = 42 млн/мл.
Соблюдение указанных основных правил постановки опыта при
определении биологической активности антибиотиков методом диффузии в
агар позволяет получить вполне сравнимые результаты.
Среди диффузионных методов определения биологической активности
наиболее широкое применение нашли три метода, рассматриваемые ниже.
Метод с использованием металлических цилиндриков. На
поверхность питательного агара в чашках Петри или в специальных кюветах
расставляют металлические цилиндрики (с внешним диаметром 8 мм,