Рубин А.Б. Современные методы биофизических исследований (Практикум по биофизике)

Подождите немного. Документ загружается.

ной

флуоресценции) и их сопоставление со спектрами поглощения

молекулы позволяют получить информацию о процессах поглоще-

ния

и излучения, о взаимной ориентации моментов переходов в

поглощении и флуоресценции. Так, для хлорофилла в касторовом

масле в области длинноволновой полосы поглощения при 660 нм

величина Р максимальна, а в области синей полосы при 430 нм —

минимальна. Таким образом, в каждой полосе поглощения наблюда-

ется свое значение степени поляризации, которое практически по-

стоянно в пределах соответствующей полосы.

Измерение степени поляризации имеет большое значение для

установления факта миграции энергии возбуждения

между

различ-

ными компонентами системы или

между

молекулами одного и того

же вещества при увеличении его концентрации. Согласно теории ди-

поль-дипольного переноса энергии, эффективность процесса зави-

сит от расстояния (в шестой степени по Ферстеру — R")

между

до-

нором и акцептором энергии и от взаимной ориентации их диполь-

ных моментов переходов fio и цд.

Критическое расстояние миграции для флуоресцеина, например,

около 5,0 нм, а для хлорофилла — около 8,0 нм. Наиболее эффек-

тивен перенос энергии в случае, когда fi

параллелен цд (т. е.

а -•- 0), однако миграция, хотя и с меньшей эффективностью, бу-

дет идти, если строгая параллельность

между

и ц

не соблюда-

ется. Очевидно, что следствием миграции энергии

будет

деполяри-

зация

флуоресценции, которая наблюдается, например, при увели-

чении концентрации флуоресцирующих молекул и их сближении.

Передача энергии возбуждения от одной молекулы к другой приве-

дет к потере первоначальной анизотропии распределения возбуж-

денных молекул и, следовательно, к деполяризации флуоресцен-

ции.

В соответствии с уравнением Вебера

II / 1 МЛ •

*п/У

*в10»

.3 [Ра 3)(

15*

где Р

— степень предельной поляризации (значение Р в

отсутст-

вие деполяризации); R — критическое расстояние

между

парал-

лельными диполями, на котором вероятности миграции и испуска-

ния

энергии равны; d — диаметр молекулы, с — концентрация,

моль/л; N

— число Авогадро; знак «+» соответствует возбуж-

дению естественным светом, а знак «—» — вертикально поляризо-

ванным. Показано, что в растворах хлорофилла концентрационная

деполяризация наблюдается уже при концентрациях около

10~

г/см

, а у растворов порфиринов — при 10~

г/см

Миграцию энергии исследуют методом поляризации флуорес-

ценции

в условиях, когда практически исключено влияние

других

факторов, уменьшающих степень поляризации (в вязких средах,

при низких температурах и т.п.).

Ранее предполагали, что за времена жизни порядка 10~

—

—10~

с молекулы не успевают изменить своей ориентации (жест-

кая

система). Однако если вязкость среды мала, то еще до акта ис-

пускания анизотропия возбужденных молекул

будет

утрачена и ус-

тановится случайное распределение ориентации, что приведет к де-

поляризации

флуоресценции. Таким образом, степень поляриза-

ции

Р определяется как

углом

между

осями поглощающего и флуо-

ресцирующего осциллятора, так и поворотом молекулы за время

жизни

флуоресценции т, который зависит от условий среды (тем-

пературы, вязкости) и особенностей строения самой молекулы (раз-

меров, формы, асимметрии, сольватации и т. п.). При определен-

ных соотношениях

между

т и периодом поворота молекулы вокруг

своей оси степень поляризации

будет

изменяться от максимального

значения

до нуля.

Средний период вращения, называемый

временем

вращательной

релаксации р, связан с молярным объемом (V), коэффициентом вяз-

кости среды (ц) И температурой следующим соотношением: р =

3Vr\ IRT. Это соотношение выведено из предположения о сфери-

ческой форме молекулы.

В соответствии с уравнением Левшина:

/Р

— 1/3 = [

— (3/2)

sin

р] (1 /Р —

/3),

где Р

— предельное значение степени поляризации, Р — изме-

ряемая степень поляризации в эксперименте при устранении

всех

деполяризующих факторов, р* — средний

угол

поворота молекулы

за время возбужденного состояния (т). Показано, что sin

p" =

(2/3) RT т/ (Vr\ + RTx),

откуда

нетрудно получить соотноше-

ние

1 1 \ ЯГт

Эту формулу используют при изучении свойств различных моле-

кул (объема, симметрии), микро- и макровязкости, а также времени

жизни

возбужденного состояния. Для экспериментальных опреде-

лений

молекулярного объема сферических частиц используют за-

висимость \1Р от Т/ц, которая в соответствии с последним уравне-

нием

линейна.

При

исследовании биополимеров их молекулы обычно аппрокси-

мируют эллипсоидами вращения и время релаксации р

эл

при этом

вычисляют из времен релаксации, соответствующих вращению моле-

кулы вокруг осей эллипсоида. Оценку асимметрии макромолекул и

формы биополимеров производят из соотношения времени релакса-

ции

эл

и р

, где ро

соответствует

сферической частице того же объ-

ема, что и частица, аппроксимированная эллипсоидом вращения

с известным соотношением осей LJL^. Затем строят зависимость

величины р

эл

/р

от

которая представлена на рис. 20.

Методы поляризационной спектрофлуориметрии нашли широ-

кое применение при изучении особенностей ориентации различных

компонентов фотосинтетических мембран in

vivo.

В частности, ис-

2,0

1,0

iz 16 го

Рис.

20. Теоретическая зависи-

мость рзл/ро от L\/L

(объяснение

см.

в тексте)

следование спектров поляризован-

ной

флуоресценции хлоропластов

высших растений и зеленых водо-

рослей позволило в ряде

случаев

установить ориентацию моментов

переходов по отношению к плос-

кости фотосинтетической мембра-

ны

для различных излучающих

центров (форм) хлорофилла а.

Спектры поляризованной флуорес-

ценции

при этом измеряли для

объектов (хлоропластов, однокле-

точных водорослей), предварительно ориентированных в постоян-

ном

магнитном поле или в полиакриламидном

геле

при его деформа-

ций.

Существенно подчеркнуть, что ориентация мембран остава-

лась фиксированной в процессе измерения спектров,

чего

достигали

постоянным

наложением магнитного поля, низкими температура-

ми

(вплоть до 77 К) или использованием полиакриламидного геля.

Рассмотрим излучение фотосинтетических мембран, ориентиро-

ванных, например, в магнитном поле. Обычно такие мембраны для

хлоропластов и клеток хлореллы ориентируются перпендикулярно

магнитным силовым линиям. Пусть мембраны идеально ориентиро-

ваны параллельно плоскости хОг, т. е. направление оси у совпадает

с направлением магнитных силовых линий (рис. 21).

Ограничимся рассмотрением излучения одного флуоресцирую-

щего центра (формы) пигмента. Сделаем предположение, что диполь-

ные моменты p.i излучающих электронных переходов ориентированы

одинаковым образом по отношению к плоскости мембраны, образуя

угол

р с нормалью к этой плоскости xOz. Векторы моментов пере-

ходов

можно считать равномерно распределенными в пространстве

Рис.

21. Поляризация флуоресценции ориентированных фотосинтетических

мембран

вокруг оси у и образующими конус с вершиной в точке О (начало

координат) и

углом

2р* при вершине. Интенсивность излучения F

не-

которого /-го момента перехода щ, направленного вдоль оси х

(ось наблюдения флуоресценции), поляризованного в плоскости,

параллельной плоскости ориентации мембран хОг и перпендику-

лярной

ей хОу,

будет

определяться произведением некоторого по-

стоянного множителя а, зависящего от условий измерения, на квад-

рат проекции вектора ji на соответствующие оси Ог и Оу (\к

1г

где fj|| и F

— компоненты излучения i-ro перехода, поляризо-

ванные параллельно и перпендикулярно плоскости мембраны

хОг.

В свою очередь, соответствующие проекции момента перехода

определяются величиной вектора ц с учетом

угла

между

ц и нор-

малью к плоскости хОг и

угла

а, образованного проекцией р. на

плоскость хОг и осью х: ц% — ц.

sin

j$ sin

a; ц?„ = \i

cos

Таким

образом,

F.-ц

= ац* sin

p sin

= ац

cos

При

усреднении по всем

углам

а получается

<F,,>

= (an

/2)sin

= a

cos

Опустив

знак

усреднения < >, поскольку в дальнейшем опера-

ции

производят только с величинами < F,, > и < F

>, можно

записать, что

где PF — поляризационное отношение.

Отсюда

следует,

что величина

угла

р может быть определена из

соотношения

/Fj_,

т. е. Р = arctg ± (\^2PF). Это означает,

что при измерении интенсивности флуоресценции, поляризованной

параллельно и перпендикулярно плоскости мембраны, можно

вычислить

угол

наклона дипольных моментов перехода излучаю-

щих молекул пигмента по отношению к этой плоскости. В общем

случае

для данного излучающего центра (некоторой молекулы или

молекул пигмента)

угол

р может принимать с определенной веро-

ятностью любое значение от 0 до я/2. В таком

случае

величина PF

определяет параметры ориентации так называемого

усредненного

перехода,

т. е. момента перехода, ориентированного таким образом,

что поляризация его излучения или поглощения совпадает с реги-

стрируемой в опыте поляризацией излучения или поглощения все-

го образца.

Очевидно что в

случае

хаотической ориентации моментов пере-

ходов

PF = 1, т. е. FJI - F

и Р = arctg (± ]/"2) « ± 54° 40'.

Если PF > 1, то р >

54°40\

а при PF < 1 р <

54°40'.

Так как

— это

угол

между

вектором дипольного момента и нормалью

плоскости мембраны, то при параллельной этой плоскости ориен-

тации ц

угол

Р = я/2, а при перпендикулярной — р = 0.

Таким

образом, величину

угла

ориентации усредненного момен-

та

перехода

ц, а следовательно, и поляризационное отношение PF

можно использовать в качестве меры упорядоченности таких пере-

ходов

излучающего центра (молекул) пигмента по отношению к

плоскости фотосинтетической мембраны. На практике, кроме ве-

личины PF часто измеряют разность

между

/•",, и F

(AF =- F

—

Очевидно, что

AF = a\i

[(1/2)

sin

P—cos

= ац

[(1—3 cos

P)/2].

Поскольку величина ац

для данного образца постоянна, для опи-

сания

степени упорядоченности может быть использовано соотно-

шение (1—3 cos

P)/2 —- q, которое называется

фактором

порядка

(или

параметром порядка). Если (л/2) > Р >

54°40',

то (1/2) >

> q > 0, а при р <

54°40'

величина q < 0.

Поляризационное

отношение и фактор порядка связаны соот-

ношением

PF = (1 + <7)/(1 — q)- Преимущество измерения вели-

чины

PF для определения степени ориентации моментов переходов

состоит в том, что эта величина не зависит от формы полосы флуо-

ресценции.

Однако в

случае

смеси различных молекул, ориентация

которых неодинакова, а спектры флуоресценции перекрываются,

использовать поляризационное отношение необходимо с осторож-

ностью. С

другой

стороны, так как форма полосы в спектрах AF =

/ (К) повторяет форму соответствующей полосы в спектрах флуо-

ресценции,

регистрация таких поляризационных спектров позво-

ляет определить вид спектров флуоресценции ориентированных мо-

лекул

пигмента.

Приведенное выше рассмотрение сделано исходя из предположе-

ния

о том, что фотосинтетические мембраны идеальным образом

ориентированы. В реальных ситуациях, однако, получить образцы с

такой степенью ориентации фотосинтетических мембран не

удается.

Основными причинами неполной ориентации фотосинтетических

мембран являются нарушение ориентации хлоропластов или кле-

ток

водорослей вследствие теплового движения и естественная кри-

визна

нативных мембран. Первая причина может быть частично или

полностью устранена применением вязких сред, мощных ориенти-

рующих

полей и замораживанием ориентированных объектов.

Влияния

естественной кривизны мембран избежать невозможно,

что предъявляет повышенные требования к выбору объекта иссле-

дования и методам приготовления образцов.

Для измерения поляризации флуоресценции в зависимости от

степени сложности получаемой информации применяют различные

установки — поляризационные флуориметры с фильтрами, с одним

или

двумя монохроматорами. Перед регистрирующим свет флуорес-

ценции

фотоумножителем (или фотоэлементом) помещается поля-

роид (поляризационный фильтр), который служит анализатором.

За

анализатором обычно располагается деполяризатор (поляриза-

ционный

фильтр), чтобы избежать ошибок при регистрации, возни-

кающих вследствие различной чувствительности фотокатода к вер-

тикально и горизонтально поляризованному

свету.

Возбуждающий

свет, падающий на флуоресцирующий образец, может быть либо не-

поляризованным,

либо плоскополяризованным. В последнем слу-

чае возбуждающий флуоресценцию свет проходит через поляроид

(поляризатор).

Поворачивая анализатор, расположенный за об-

разцом, можно определить максимальное и минимальное значения

интенсивности флуоресценции. При повороте анализатора на л/2 бу-

дут поочередно пропускаться вертикальный и горизонтальный ком-

поненты флуоресценции (F

и F

). Поляризация флоуресценции

растворов, как правило, измеряется под прямым

углом

к направле-

нию

распространения возбуждающего света, хотя возможно и дру-

гое взаиморасположение возбуждающего и флуоресцирующего лу-

чей. На рис. 22 показана схема простейшей установки с фильтрами

для выделения необходимых областей возбуждения и излучения,

которая может быть использована для измерения поляризации

флуоресценции.

В современных приборах возбуждение флуоресценции произво-

дится с помощью монохроматора. Анализ этой флуоресценции осу-

ществляется другим монохроматором.

При

статическом

методе,

основанном на непосредственном срав-

нении

двух

световых потоков, поляризованных во взаимно перпен-

дикулярных плоскостях, достаточно высокая точность может быть

достигнута, если степень поляризации флуоресценции объекта сра-

внительно велика. В

случае

малых значений степени поляризации

используют

дифференциальные

(динамические)

методы,

позволяю-

щие сразу регистрировать либо разницу

между

вертикальной и го-

ризонтальной составляющими флуоресценции (AF F

— F

либо степень поляризации Р -- (/•"„ — F±)

-f F

) или

cos

a (2 F

—

FJ/iFn

+ 2F

Рис.

22. Схема установки с набором

светофильтров для измерения поляри-

зации

флуоресценции:

/ — источник возбуждающего света, 2 —

светофильтр, 3 фокусирующая линза.

4—поляроид (поляризатор), 5- кюветное

отделение, 6 - светофильтр, 7 • поляроид

(анализатор), 8 линза, 9 — деполяриза-

тор, 10 — фотоумножитель, // — система

питания,

12 — система регистрации

Рис.

23.

Схема установки

для

измерения спектров поляризованной флуорес-

ценции

и ее

возбуждения (объяснение

см. в

тексте)

В качестве примера статической регистрации спектров поляри-

зованной

флуоресценции и ее возбуждения рассмотрим принципи-

альную

схему

установки, которую используют на кафедре биофизи-

ки

Биологического факультета МГУ для исследования поляриза-

ционных

характеристик фотосинтетических мембран (рис. 23).

Возбуждающий свет

от

источника

через тепловой фильтр

попадает

первый монохроматор

Монохроматический свет, проходя через систему

линз

4, 5,

зеркал

6, 7 и

поляризационный фильтр (поляризатор)

фокуси-

руется линзой

9 на

кювету

ориентированным образцом

10.

Свет флуорес-

ценции

образца собирается

на

входной щели монохроматора регистрации

(второй монохроматор

14).

Перед входной щелью этого монохроматора поме-

щены

линза

// и два

поляризационных фильтра: анализатор

12 и

деполяриза-

тор

13.

Поворот анализатора

на 90°

позволяет выделять либо вертикальную, либо

горизонтальную составляющую поляризованной флуоресценции.

За

поляри-

затором расположен

другой

поляризационный фильтр (деполяризатор),

что-

бы избавиться

от

артефактов, наблюдающихся вследствие избирательной

чувствительности флуориметра

поляризации регистрируемого излучения.

Деполяризатор

установлен таким образом, чтобы

его

плоскость поляриза-

ции

составляла

угол

45° по

отношению

плоскости поляризации света,

про-

пускаемого анализатором

12.

Точное положение

угла

поворота деполяриза-

тора подбирается

так,

чтобы

на

неориентированном объекте интенсивность

флуоресценции, поляризованной

вертикальной

горизонтальной плоско-

стях,

любом участке спектра различалась

не

более

чем на 1—2 %.

Выделенное монохроматором регистрации излучение системой линз

зеркал

15, 16

формируется

параллельный пучок

попадает

на

фотоумножи-

тель

17;

затем фототок, пройдя систему детектирования

усиления, поступа-

ет

на

самопишущий потенциометр

18.

Установка позволяет регистрировать

спектры поляризованной флуоресценции и ее возбуждения при комнатной

низкой

температурах

(объект помещается в

сосуд

Дьюара с жидким азо-

том).

При

динамических

методах

регистрации степени поляризации

флуоресценции принципиальная

схема

установки практически мо-

жет не отличаться от описанной выше, только после второго моно-

хроматора помещают призму Рошона и вращающийся диск с от-

верстиями. Призма Рошона разлагает свет флуоресценции на два

поляризованных компонента, а вращающийся диск

модулирует

оба пучка с различной частотой. В

результате

оба

луча

попадают на

фотокатод одного фотоумножителя и после усиления сигналы пере-

менного тока разделяются, преобразуются в постоянный ток и по-

лучаемые

величины напряжения

будут

пропорциональны F\\ и

. Далее для регистрации и непосредственной записи степени по-

ляризации

можно использовать

малую

аналоговую вычислитель-

ную машину.

При

другой

системе регистрации анализатор равномерно враща-

ется с постоянной частотой со. Расчеты показывают, что в этом слу-

чае фототок имеет постоянную составляющую, которая пропорцио-

нальна (F|| + F

), и переменную составляющую частоты 2ш с ам-

плитудой, пропорциональной (F\\ — F

). Измерение степени поля-

ризации

флуоресценции, таким образом, сводится к измерению глу-

бины

модуляции фототока, т. е. к регистрации соотношения ампли-

туд

между

переменной (синусоидальной) и постоянной составляю-

щими.

Существуют

другие

вариации дифференциальных методов

измерения

поляризованной флуоресценции.

§11.

Фосфоресценция

методы

ее

измерения

Одним из путей безызлучательной дезактивации возбужденной мо-

лекулы является интеркомбинационная конверсия k

в триплет-

ное состояние. Поскольку нижний колебательный подуровень пер-

вого (нижнего) триплетного состояния Т

находится несколько ни-

же самого низкого подуровня первого синглетного возбужденного

состояния

более высокие колебательные подуровни для 7

могут

оказаться на одном уровне с этим колебательным подуров-

нем S

. Интеркомбинационная конверсия как раз и происходит

вследствие перехода с нижнего подуровня S

на высокий колеба-

тельный подуровень 7\.

Если в соответствии с принципом Франка — Кондона предста-

вить электронно-возбужденные состояния молекул, способных пере-

ходить

в триплет, в виде потенциальных кривых, то очевидно, что

кривые для Sj и 7\ должны пересекаться в некоторой точке М

(рис.

24). При поглощении света молекула переходит из основного

состояния

в первое электронно-возбужденное состояние S

Молекула быстро теряет избыток колебательной энергии, что соот-

ветствует

движению изображающей точки вдоль потенциальной

Рис.

24.

Зависимость потен-

циальной энергии

(Е) двух-

атомной молекулы

от меж-

атомного расстояния

(г):

и 5| — основной и возбуж-

денный синглетные уровни.

Г| — триплетный уровень

(коле-

бательные подуровни не по-

казаны); стрелками вверх и

вниз обозначены поглощение и

фосфоресценция

соответственно

кривой

Si до

точки

М. В

точке

поло-

жения

импульсы ядер

для

возбужден-

ного синглетного уровня

первого

триплетного уровня

оказываются

одинаковыми.

Это

означает,

что

молекула

точке

может перейти

на

соответствующий подуровень трип-

летного состояния. Поскольку было

по-

казано,

что

вероятность заселения трип-

лета

не

зависит

от

длины волны

возбуж-

дающего света, можно считать,

что у

сложных молекул должна существовать

хотя

бы

одна точка, расположенная

непосредственной близости

от

наиболее

низкого

колебательного подуровня

воз-

бужденного синглетного состояния.

Для некоторых молекул интеркомби-

национная

конверсия возникает вслед-

ствие термической активиции

из ниж-

него

на

верхние колебательные подуров-

ни

Sj-состояния. Излучательный

переход

(запрещенный

по

спину)

триплетного

уровня

на

основной

(Т

-*•

йу

фосф

)

приводит

появлению

фос-

форесценции

полосой, расположенной

спектре

более длинно-

волновой области,

чем

полоса флуоресценции. Время жизни

фосф

как

правило, существенно больше времени жизни флуоресценции

доходит

ряде

случаев

до

секунд. Квантовый

выход

фосфоресцен-

ции

ффосф. который представляет собой отношение числа квантов

фосфоресценции

фосф

числу поглощенных квантов

погл

т. е.

Ффооф

Лфосф/Япогл- обычно ниже квантового

выхода

флуоресцен-

ции.

Например,

для

красителей

жестких

средах

фосф

~0,01.

Однако

для

молекул некоторых типов квантовый

выход

фосфорес-

ценции

превышает

фл

Константа скорости интеркомбинационной конверсии

тринлетное состояние является важным фотохимическим парамет-

ром.

растворах скорость излучательного перехода

(Tj

-*-

)

оказывается гораздо меньшей по сравнению

со

скоростями интерком-

бинационной

конверсии

и (или)

тушения триплетного состояния

примесями.

Поэтому фосфоресценцию наблюдают,

как

правило,

относительно жестких системах

и при

низких

температурах.

Интен-

сивность фосфоресценции

затухает

обычно

по

экспоненциальному

закону (е~'

/т

Ф°сФ)

одинаковой постоянной т

ф0(

.ф, представляю-

щей собой среднее время жизни триплетного состояния.

Фосфоресценцию необходимо отличать

от

замедленной флуорес-

ценции,

совпадающей

по

спектру

обычной (быстрой) флуоресцен-

цией

различающейся

последней лишь большей длительностью

жизни.

Появление замедленной флуоресценции связано с возвра-

щением молекулы из триплетного состояния в возбужденное пер-

вое синглетное состояние (например, за

счет

вибрационной энергии,

подведенной термически окружением молекулы) с последующим

излучательным переходом в основное состояние, что сопровождается

возникновением

флуоресценции (S

-*•

фл

Отсюда оче-

видно,

что спектр замедленной флуоресценции сдвинут в коротко-

волновую сторону по сравнению со спектром фосфоресценции.

понижением температуры (с понижением запаса тепловой энер-

гии молекулы) вероятность возвращения триплетной молекулы в

возбужденное синглетное состояние (на уровень S

) резко умень-

шается; следовательно, возрастает вероятность фосфоресценции и

уменьшается вероятность замедленной флуоресценции. Константа

скорости фосфоресценции

(£

ф0С

= 1/

ФОСФ) обычно в 10

— 10

раз

меньше, чем константа скорости быстрой флуоресценции (10

с"

Таким

образом, константа

/г

фосф

составляет около 10

— Ю"

Константа интеркомбинационной конверсии k

с возбужденного

синглетного уровня на триплетный составляет около 10

с-

. Это

означает, что процесс интеркомбинационной конверсии (S

-*•

Т) мо-

жет вполне конкурировать с процессом флуоресценции (S

->-S

Прямым

отождествлением фосфоресцентного состояния молеку-

лы с триплетным можно считать определение его парамагнетизма.

Хорошо известно, что в основном состоянии у большинства органи-

ческих молекул все электроны спарены, поэтому эти молекулы диа-

магнитны. Однако в триплетном состоянии такие многоатомные мо-

лекулы парамагнитны, поскольку они имеют два электрона с па-

раллельными спинами, которые обычно сильно взаимодействуют с

внешним

магнитным полем. Еще в конце 40-х годов было показано,

что раствор флуоресцеина в стеклообразной борной кислоте при не-

прерывном интенсивном облучении становится парамагнитным. По-

зднее

удалось

обнаружить для ряда фосфоров (из флуоресцеина или

трифенилена),

что времена затухания фосфоресценции в твердой

борной кислоте при комнатной температуре совпадают с времена-

ми

затухания их парамагнетизма и при этом затухание имеет экс-

поненциальный

вид.

Таким

образом, в

ходе

прямого возбуждения образование трип-

летного состояния маловероятно (S

-*•

7\), поскольку спин воз-

бужденного электрона должен изменить свое направление относи-

тельно исходного. Это может произойти при существовании маг-

нитного взаимодействия определенного типа с окружающей средой.

Такому

переходу

будет

способствовать, например, магнитное поле

тяжелого атома. Так интенсивная полоса поглощения и излучения

ртути

(около 254 нм) связана с переходами

между

синглетными и три-

плетными состояниями. Однако обычно

переход

в триплетное состоя-

ние

с большей вероятностью происходит именно из синглетного воз-

бужденного состояния. Это связано с тем, что возбужденный элект-

рон

распределен в большем объеме и, следовательно, взаимодейст-