Другов Ю.С., Родин А.А. Пробоподготовка в экологическом анализе

Подождите немного. Документ загружается.

îñòàâøèåñÿ íà ñîðáåíòå ñëåäîâûå êîëè÷åñòâà ïðèìåñåé ïðî÷íî óäåðæèâàþòñÿ â

ïàòðîíå.

Ïî ýòîé ïðè÷èíå ÒÔÝ ïîçâîëÿåò ãîðàçäî ëó÷øå «èçáàâëÿòüñÿ» îò ìåøàþùèõ

àíàëèçó ïðèìåñåé (ñîïóòñòâóþùèõ öåëåâûì êîìïîíåíòàì), ÷åì äðóãèå ìåòîäû

ýêñòðàêöèîííîãî èçâëå÷åíèÿ àíàëèòà èç áèîñðåä, à òàêæå èç âîäû è ðàñòâîðîâ.

Ýòî ñâîéñòâî òåõíîëîãèè ÒÔÝ îñîáåííî öåííî äëÿ ïðîáîïîäãîòîâêè â àíàëèçå

áèîñðåä. Èç ðèñ. IV.21 õîðîøî âèäíî ïðåèìóùåñòâî ÒÔÝ ïåðåä ÆÆ-ýêñòðà-

êöèåé ïîòåíöèàëüíûõ ïðèìåñåé èç õîëîñòîé ïðîáû ìî÷è. Õðîìàòîãðàììà (à)

ïîëó÷åíà ïîñëå ÒÔÝ õîëîñòîãî îáðàçöà ìî÷è (2 ìë) â ïàòðîíå Bond Elut Certify, à

õðîìàòîãðàììà (â) — ïîñëå ÆÆ-ýêñòðàêöèè ýòîãî æå îáðàçöà ìî÷è.

Õðîìàòîãðàôèðîâàíèå àíàëèòà (ýêñòðàêòà) â îáîèõ ñëó÷àÿõ âûïîëíÿëîñü íà

ãàçîâîì õðîìàòîãðàôå Âàðèàí 3500 ñ ÏÈÄ è àâòîñàìïëåðîì 8100 è ñ êàïèëëÿð-

íîé êîëîíêîé (30 ì × 0,25 ìì) ñ ñèëèêîíîì DB-5 (ïëåíêà 0,25 ìêì). Òåìïåðà-

òóðà êîëîíêè ïðîãðàììèðîâàëàñü îò 150° (1 ìèí) äî 280°Ñ (2 ìèí) ñî ñêîðîñòüþ

10°Ñ/ìèí.

Èç ðèñ. IV.21 âèäíî, ÷òî ïîñëå ÆÆ-ýêñòðàêöèè (õðîìàòîãðàììà «â») íà õðîìà-

òîãðàììå ïîÿâëÿåòñÿ ìíîãî ëîæíûõ ïèêîâ, â òî âðåìÿ êàê â ñëó÷àå ÒÔÝ (õðîìà-

òîãðàììà «à») èõ ïðàêòè÷åñêè íåò.

Îäíàêî äàæå ïîñëå òùàòåëüíîé î÷èñòêè áèîñóáñòðàòîâ ñ ïîìîùüþ ÒÔÝ â íèõ

ìîãóò åùå îñòàâàòüñÿ ïðèìåñè îðãàíè÷åñêèõ ñîåäèíåíèé, êîòîðûå áóäóò ìåøàòü

îïðåäåëåíèþ öåëåâûõ êîìïîíåíòîâ. Â ýòîì ñëó÷àå ïðè èññëåäîâàíèè êîíå÷íîãî

àíàëèòà ïðèìåíÿþò âûñîêîèíôîðìàòèâíûå ãèáðèäíûå ìåòîäû, íàïðèìåð, ÃÕ/

ÌÑ, ÂÝÆÕ/ÌÑ èëè ÃÕ/ÂÝÆÕ/ÌÑ [57].

Åùå áîëüøèå âîçìîæíîñòè ó êîìáèíèðîâàííîãî ìåòîäà, ñî÷åòàþùåãî õðî-

ìàòîãðàôè÷åñêîå ðàçäåëåíèå (ÃÕ èëè ÂÝÆÕ) ñ èññëåäîâàíèåì ýëþàòà ìåòîäîì

ßÌÐ [57, 114-116]. Ïðåäâàðèòåëüíîå ðàçäåëåíèå êîìïîíåíòîâ íà õðîìàòîãðàôè-

÷åñêîé êîëîíêå ïîçâîëÿåò ïîëó÷èòü ñ ïîìîùüþ ßÌÐ óíèêàëüíóþ èíôîðìàöèþ

î ñòðóêòóðå öåëåâûõ êîìïîíåíòîâ, íàïðèìåð, ïðè îïðåäåëåíèè ëåêàðñòâ â áèî-

ñóáñòðàòàõ.

674 Ãëàâà IV. Áèîñðåä

Ðèñ. IV.21. Õðîìàòîãðàììû ýêñòðàêòîâ õîëîñòîé ïðîáû ìî÷è, ïîëó÷åííûå ïîñëå ÒÔÝ (a)

è ÆÆ-ýêñòðàêöèè (b) [63].

Â êà÷åñòâå ïðèìåðà ÂÝÆÕ/ßÌÐ èññëåäîâàíèÿ áèîëîãè÷åñêîé æèäêîñòè

ïðèâåäåì àíàëèç ìî÷è [117]. Ïðÿìîé

H-ßÌÐ-ñïåêòð ìî÷è (ñì. ðèñ. IV.22) ïðàê-

òè÷åñêè íå ïîääàåòñÿ ðàñøèôðîâêå. Õðîìàòîãðàììà ïîêàçûâàåò ìíîæåñòâî ôðàê-

öèé, ñïåêòðû êîòîðûõ (ðèñ. IV.22, âíèçó) ìîãóò áûòü èíäèâèäóàëüíî èçìåðåíû

â ðåàëüíîì ìàñøòàáå èëè ñ îñòàíîâêîé ïîòîêà (õðîìàòîãðàììû íà ðèñ. IV.22,

ââåðõó). ÂÝÆÕ/ßÌÐ èññëåäîâàíèå ïîçâîëèëî âïåðâûå îáíàðóæèòü â ìî÷å ïÿòü

íîâûõ òîêñè÷íûõ ìåòàáîëèòîâ èáóïðîôåíà (ëåêàðñòâî îò ãîëîâíîé áîëè): ýôèð

ýòîãî ñîåäèíåíèÿ — ãëþêóðîíèä èáóïðîôåíà, ãèäðîêñèëèðîâàííûé â áîêîâîé

öåïè ìåòàáîëèò è åãî ãëþêóðîíèä, îêñèäèðîâàííûé â áîêîâîé öåïè ìåòàáîëèò

êàðáîíîâîé êèñëîòû è åãî ãëþêóðîíèä [116].

Ñëîæíîñòü è îòíîñèòåëüíî âûñîêàÿ ñòîèìîñòü àïïàðàòóðû äëÿ ÂÝÆÕ/ßÌÐ-

è ÃÕ/ßÌÐ-èññëåäîâàíèé ïîêà îãðàíè÷èâàþò èõ ïðèìåíåíèå â ïðàêòè÷åñêéî

àíàëèòèêå è ýêîëîãè÷åñêîé àíàëèòè÷åñêîé õèìèè. Îäíàêî âîçìîæíîñòè ïðîâå-

äåíèÿ òîíêèõ ñòðóêòóðíûõ èññëåäîâàíèé ýòèìè ìåòîäàìè â íåêîòîðûõ ñëó÷àÿõ

ìîãóò îêàçàòüñÿ åäèíñòâåííî ïðèåìëåìûìè ñïîñîáàìè íàäåæíîé èäåíòèôèêà-

öèè êîìïîíåíòîâ ñëîæíûõ ñìåñåé ðåàëüíûõ çàãðÿçíåíèé îêðóæàþùåé ñðåäû è

áèîñóáñòðàòîâ.

Ïîñëå ãàçîõðîìàòîãðàôè÷åñêîãî ðàçäåëåíèÿ ñìåñåé äëÿ èõ èäåíòèôèêàöèè

÷àùå âñåãî èñïîëüçóþò äðóãèå ñïåêòðàëüíûå ìåòîäû — ÈÊ-, ÓÔ- èëè ìàññ-ñïåê-

òðîìåòðèþ, à ßÌÐ-ñïåêòðû ñíèìàþò ëèøü â íåêîòîðûõ ñëó÷àÿõ äëÿ ïîäòâåðæäå-

íèÿ (ïî ñòðóêòóðå ìîëåêóë) ïðàâèëüíîñòè èäåíòèôèêàöèè, ïðîâåäåííîé äðóãèìè

ìåòîäàìè. ×àùå âñåãî ýòî êîìáèíàöèè ÃÕ/ÌÑ/ÈÊÔ/ßÌÐ, ÃÕ/ÌÑ/ÀÝÄ/ßÌÐ,

ÂÝÆÕ/ÃÕ/ÌÑ/ßÌÐ è äð.

4.3.2 Êðîâü

Ñêðèíèíã, èäåíòèôèêàöèþ è êîëè÷åñòâåííîå îïðåäåëåíèå èíäèâèäóàëüíûõ ôàð-

ìàöåâòè÷åñêèõ ïðåïàðàòîâ â öåëüíîé êðîâè, ïëàçìå è ñûâîðîòêå êðîâè âûïîëíÿ-

þò ìåòîäîì ãàçîâîé õðîìàòîãðàôèè èëè (÷àùå) ÂÝÆÕ ïîñëå èçâëå÷åíèÿ ëåêàðñòâ

èç ìàòðèöû ñ ïîìîùüþ ÒÔÝ [44, 45, 63, 118], ÒÔÌÝ [119], ÆÆ-ýêñòðàêöèè [63,

120], à òàêæå ïîñðåäñòâîì êèñëîòíîãî èëè ôåðìåíòàòèâíîãî ãèäðîëèçà [120].

Àâòîìàòè÷åñêîå îïðåäåëåíèå èíãèáèòîðîâ ïðîòåàçû (ïîòåíöèàëüíûõ ïðîòè-

âîîïóõîëåâûõ ïðåïàðàòîâ) â îáðàçöàõ ïëàçìû êðîâè è õðÿùåâûõ òêàíåé [118]

áûëî ñäåëàíî ìåòîäîì ÂÝÆÕ/ÌÑ (òàíäåìíîé) ïîñëå âûäåëåíèÿ öåëåâûõ êîìïî-

Ëåêàðñòâà 675

Ðèñ. IV.22. Èäåíòèôèêàöèÿ ìåòàáîëè-

òîâ èáóïðîôåíà â ìî÷å ñ ïîìîùüþ ñèñ-

òåìû ÂÝÆÕ/ßÌÐ [116, 117].

íåíòîâ èç îáðàçöîâ ñ ïîìîùüþ ÒÔÝ ñ ïðèìåíåíèåì ïëàíøåòíûõ øòàòèâîâ íà 96

ïîçèöèé (ëóíîê).

Íîâûå ïëàíøåòíûå øòàòèâû íà 96 ïîçèöèé VersaPlate îò Varian ïîçâîëÿþò

àâòîìàòèçèðîâàòü ïðîöåññ òâåðäîôàçíîé ýêñòðàêöèè. Ýòè øòàòèâû ñîâìåñòèìû

ñ áîëüøèì êîëè÷åñòâîì ðàçëè÷íûõ àâòîìàòè÷åñêèõ ðàáî÷èõ ñòàíöèé, îñóùåñòâ-

ëÿþùèõ îäíîâðåìåííóþ ýêñòðàêöèþ 96 ïðîá. Â ýòè øòàòèâû êðåïÿòñÿ êàê ýêñò-

ðàêöèîííûå ïàòðîíû BondElut, Nexus, Certify, òàê è ýêñòðàêöèîííûå äèñêîâûå

êàðòðèäæè. Øòàòèâû VersaPlate äîñòóïíû â ôèêñèðîâàííîì ôîðìàòå (ìîãóò áûòü

óñòàíîâëåíû â àâòîñýìïëåð) èëè â ôîðìàòå User Assembled äëÿ ðåøåíèÿ ñïåöèôè-

÷åñêèõ çàäà÷ ïîëüçîâàòåëÿ. 96-ïîçèöèîííûå ïëàíøåòíûå øòàòèâû íåîáõîäèìû

äëÿ áûñòðîé ðàçðàáîòêè ìåòîäèê ýêñòðàêöèè, à òàêæå äëÿ ïîâûøåíèÿ ïðîáîïî-

òîêà [63].

Âàæíûé äëÿ êëèíè÷åñêîé ïñèõèàòðèè ôàðìàöåâòè÷åñêèé àíàëèç ïî îïðåäåëå-

íèþ òðèöèêëè÷åñêèõ àíòèäåïðåññàíòîâ â ïëàçìå è ñûâîðîòêå êðîâè âûïîëíåí ñ

ïîìîùüþ ÂÝÆÕ/ÓÔÄ, à äëÿ âûäåëåíèÿ ëåêàðñòâ èç ìàòðèöû èñïîëüçîâàëè ÒÔÝ

[44, 45].

Â îäíîé èç ýòèõ ìåòîäèê [44] ëåêàðñòâà èçâëåêàëè èç ñûâîðîòêè êðîâè â

ýêñòðàêöèîííîé òðóáêå Supelclean LC-WC åìêîñòüþ 1 ìë ñ 0,1 ã ñîðáåíòà.

Êîíäèöèîíèðîâàíèå ñîðáåíòà (ïîäðîáíåå ñì. ðàçäåë 2.3.1 â ãëàâå II) ïðîâîäè-

ëè äîáàâëåíèåì 500 ìêë 0,5 Ì ðàñòâîðà ôîñôîðíîé êèñëîòû è 1 ìë äåèîíè-

çîâàííîé âîäû. Çàòåì äîáàâëÿëè 1 ìë ðàñòâîðà îáðàçöà (ñûâîðîòêè êðîâè) â

äåèîíèçîâàííîé âîäå (50:50). Ñîðáåíò â ýêñòðàêöèîííîì ïàòðîíå ïðîìûâà-

ëè 1 ìë äåèîíèçîâàííîé âîäû, 500 ìêë 1,0 Ì ðàñòâîðà NH

OH è (2 × 1 ìë)

5%-íîãî âîäíîãî ðàñòâîðà ìåòàíîëà. Öåëåâûå êîìïîíåíòû ýëþèðîâàëè (2 × 1 ìë)

0,22 Ì ðàñòâîðà NH

OH â ìåòàíîëå, âûïàðèâàëè ýëþàò äî ñóõîãî ñîñòîÿíèÿ â òîêå

àçîòà è äîáàâëÿëè ýòîò îñòàòîê ê 250 ìêë ïîäâèæíîé ôàçû äëÿ ÂÝÆÕ.

Ðàçäåëåíèå êîìïîíåíòîâ ýëþàòà (ïðîáà 100 ìêë) îñóùåñòâëÿëè íà êîëîíêå (25

ñì × 4,6 ìì) ñ Ñóïåëêîñèëîì LC-PCN (÷àñòèöû ðàçìåðîì 5 ìêì) â òîêå ìîáèëü-

íîé ôàçû àöåòîíèòðèë/ìåòàíîë/0,01 Ì K

HPO

, pH=7 (60:15:25) ïðè ðàñõîäå 2,0

ìë/ìèí. Äåòåêòîð ÓÔÄ (215 íì). Ïîëó÷åííàÿ â ýòèõ óñëîâèÿõ õðîìàòîãðàììà

èçîáðàæåíà íà ðèñ. IV.23.

Ïðè ðàçäåëåíèè àíàëîãè÷íîé ñìåñè àíòèäåïðåññàíòîâ è èõ ìåòàáîëèòîâ ìåòî-

äîì ÂÝÆÕ [45] çíà÷èòåëüíîå âëèÿíèå íà ýôôåêòèâíîñòü ðàçäåëåíèÿ öåëåâûõ

êîìïîíåíòîâ îêàçûâàåò ðàçìåð ÷àñòèö ñîðáåíòà. Ñìåñü ëåêàðñòâ õðîìàòîãðàôèðî-

âàëè íà êîëîíêàõ (150 × 4,6) ìì ñ ZORBAX SB-C18 (÷àñòèöû 3,5 ìêì) è ZORBAX

300 SB-C18 (÷àñòèöû 5 ìêì) â ïîòîêå ìîáèëüíîé ôàçû — (40:60) 25 ìÌ ôîñôàò-

íîãî áóôåðà è 10 ìÌ òðèýòèëàìèíà (ðÍ=6) è àêðèëîíèòðèëà, ñêîðîñòü êîòîðîé

ñîñòàâëÿëà 1,2 ìë/ìèí. Ðàçäåëåíèå îñóùåñòâëÿëè ïðè òåìïåðàòóðå îêðóæàþùåãî

âîçäóõà ñ ÓÔÄ (254 íì). Ïîëó÷åííàÿ õðîìàòîãðàììà ïðåäñòàâëåíà íà ðèñ. IV.24.

Ïðè àíàëèçå ïðîáû 10 ìêë êîíöåíòðàöèÿ ëåêàðñòâ ñîñòàâèëà 10 ìêã/ìë. Êàê âèä-

íî èç ýòîãî ðèñóíêà, áîëåå ìåëêèé ñîðáåíò ïîçâîëÿåò äîáèòüñÿ ñóùåñòâåííî áîëü-

øåé ýôôåêòèâíîñòè ðàçäåëåíèÿ ëåêàðñòâåííûõ ïðåïàðàòîâ è èõ ìåòàáîëèòîâ.

Âñåãî çà 22 ìèí ìîæíî ïðîâåñòè ñêðèíèíã ïîäîáíîé ñìåñè ôàðìàöåâòè÷åñêèõ

ïðåïàðàòîâ â ñûâîðîòêå êðîâè ìåòîäîì ãàçîâîé õðîìàòîãðàôèè [45] íà êàïèëëÿð-

íîé êîëîíêå (50 ì × 0,32 ìì) ñ Óëüòðà-2 (ïîïåðå÷íîñøèòûé ôåíèëìåòèëñèëè-

676 Ãëàâà IV. Áèîñðåä

êîí, ïëåíêà 0,52 ìêì) ïðè ïðîãðàììèðîâàíèè òåìïåðàòóðû è èñïîëüçîâàíèè â

êà÷åñòâå ãàçà-íîñèòåëÿ âîäîðîäà (80 ñì/ñ) ñ ÏÈÄ. Õðîìàòîãðàììà ïðåäñòàâëåíà

íà ðèñ. IV.25.

Ïîñëå ýêñòðàêöèîííîãî èçâëå÷åíèÿ èç ïëàçìû êðîâè ìîðôèíà è åãî ìåòàáî-

ëèòîâ èõ ìîæíî äåòåêòèðîâàòü îäíîâðåìåííî äâóìÿ äåòåêòîðàìè (ýëåêòðîõèìè÷å-

ñêèé è ôëóîðåñöåíòíûé), åñëè ðàçäåëèòü êîíòðîëèðóåìûå êîìïîíåíòû ìåòîäîì

ÂÝÆÕ [45]. Íàðêîòèêè (50 ìêë ýêñòðàêòà) ðàçäåëÿëè íà êîëîíêå (150 × 4,6) ìì

ñ ñîðáåíòîì ZORBAX SB-C18 (÷àñòèöû 3,5 ìêì) ñ ìîáèëüíîé ôàçîé — 70 ìÌ

è ñìåñü 1 ìÌ ÅÄÒÀ/àêðèëîíèòðèë (ðÍ=4,5), ñêîðîñòü ïîòîêà êîòîðîé

ñîñòàâëÿëà 1,5 ìë/ìèí, ïðè òåìïåðàòóðå îêðóæàþùåé ñðåäû. Õðîìàòîãðàììà

ïðåäñòàâëåíà íà ðèñ. IV.26.

Àíàëîãè÷íûå ìåòîäèêè (ÂÝÆÕ/ÌÑ, ÃÕ/ÌÑ, ÃÕ/ÏÈÄ/ÒÈÄ/ÏÔÄ/ ÀÝÄ/

ÝÇÄ) èñïîëüçóþò è ïðè îïðåäåëåíèè íàðêîòèêîâ è àíàáîëè÷åñêèõ ñòåðîèäîâ â

áèîëîãè÷åñêèõ æèäêîñòÿõ ïðè äîïèíã-êîíòðîëå [24], â ñóäåáíî-ìåäèöèíñêèõ

èññëåäîâàíèÿõ (áûñòðûé ñêðèíèíã ëåêàðñòâ è èõ ìåòàáîëèòîâ ïðè çëîóïîòðåáëå-

íèÿõ) [121, 131, 132], ïðè îïðåäåëåíèè ëåêàðñòâ â êðîâè [122], ñëþíå è ïîòå [123],

âîëîñàõ [124] ïðè çëîóïîòðåáëåíèÿõ, îïðåäåëåíèè àìôåòàìèíîâ â êðîâè è ìî÷å

[125] è áåíçîäèàçåïèíîâ (òðàíêâèëèçàòîðû) â áèîëîãè÷åñêèõ æèäêîñòÿõ [126].

Ìàññ-ñïåêòðîìåòðè÷åñêèå è ãàçîõðîìàòîãðàôè÷åñêèå äàííûå äëÿ ëåêàðñòâ, ÿäîâ,

ïåñòèöèäîâ, çàãðÿçíèòåëåé îêðóæàþùåé ñðåäû è áèîñðåä è èõ ìåòàáîëèòîâ ïðèâå-

äåíû â ìîíîãðàôèè [132].

Ñêðèíèíã ñîäåðæàíèé íàðêîòèêîâ â áèîñóáñòðàòàõ (ôåíàòèí, êîêàèí, êîäå-

èí, ãåðîèí) ìîæíî ïðîâåñòè âñåãî çà 300 ñ íà ìîäèôèöèðîâàííîì îòå÷åñòâåííîì

Ëåêàðñòâà 677

Ðèñ. IV.23. ÂÝÆÕ-ðàçäåëåíèå òðèöèêëè-

÷åñêèõ àíòèäåïðåññàíòîâ, âûäåëåííûõ

èç ñûâîðîòêè êðîâè ìåòîäîì ÒÔÝ [44].

Ïîÿñíåíèÿ â òåêñòå.

õðîìàòîãðàôå Öâåò-500 Ì ñ ïîëèêàïèëëÿðíûìè êîëîíêàìè ÏÊÊ [127, 128].

Õðîìàòîãðàôèðîâàíèå îñóùåñòâëÿåòñÿ â áëîêå èç 1200 ÏÊÊ, êàæäàÿ èç êîòîðûõ

èìååò ðàçìåð (1 ì × 0,2 ìêì) ñ ñèëèêîíîì SE-30 ïðè 210°Ñ: ââîä ïðîáû (1 ìêë)

ñ äåëèòåëåì ïîòîêà. Õðîìàòîãðàììà íàðêîòèêîâ ïðåäñòàâëåíà íà ðèñ. IV.27-A.

ÏÊÊ ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé (ñì. òàêæå ãëàâó I) ìåòðîâûé ìîíîëèòíûé ïó÷îê èç

~1000 ïàðàëëåëüíî ðàáîòàþùèõ (40 ìêì) êàïèëÿðîâ ñ èììîáèëèçîâàííîé ÍÆÔ

(ðèñ. IV.27-Á).

Ñîðáåíò íà îñíîâå ìîäèôèöèðîâàííîãî ñèëèêàãåëÿ Bond Elut C8 (ôèðìà

Âàðèàí, ÑØÀ) ïîçâîëÿåò (ñì. ðàçäåë 2.3 â ãëàâå II) îäíîâðåìåííî ýêñòðàãèðîâàòü

678 Ãëàâà IV. Áèîñðåä

Ðèñ. IV.24. ÂÝÆÕ-ðàçäåëåíèå òðè-

öèêëè÷åñêèõ àíòèäåïðåññàíòîâ è èõ

ìåòàáîëèòîâ íà êîëîíêàõ ñ ðàçëè÷íûì

ðàçìåðîì ÷àñòèö ñîðáåíòà: 3,5 ìêì

(ââåðõó) è 5 ìêì (âíèçó) [45].

Ðèñ. IV.25. Ñêðèíèíã ëåêàðñòâåí-

íûõ ïðåïàðàòîâ â ñûâîðîòêå êðîâè

ìåòîäîì ÃÕ/ÏÈÄ [45]. Ïîÿñíåíèÿ

â òåêñòå.

èç ñûâîðîòêè ÷åëîâå÷åñêîé êðîâè âèòàìèíû, ðàñòâîðèìûå è â æèðå è â âîäå, â

îäíîì ïàòðîíå [63]. Òàêèå ïàòðîíû ñïîñîáíû ýêñòðàãèðîâàòü ñ âûñîêîé ýôôåê-

òèâíîñòüþ è ìèíèìàëüíîé ïðîáîïîäãîòîâêîé ñðàçó 10 âèòàìèíîâ äëÿ èõ ïîñëå-

äóþùåãî îïðåäåëåíèÿ ìåòîäîì ÂÝÆÕ ñ íèçêèì ïðåäåëîì îáíàðóæåíèÿ. Êðîìå

òîãî, ïðèìåíåíèå ñîðáåíòà Bond Elut C8 ýêîíîìè÷íî, ñíèæàåò ðàñõîä ðàñòâîðèòå-

ëÿ è îáðàçöà, ìîæåò áûòü ëåãêî àâòîìàòèçèðîâàíî è ïîçâîëÿåò äî òàêîé ñòåïåíè

î÷èñòèòü ýêñòðàêò êîíòðîëèðóåìûõ êîìïîíåíòîâ, ÷òî ýòî ñâîäèò ê ìèíèìóìó õðî-

ìàòîãðàôè÷åñêèé ôîí è ïîâûøàåò ñðîê ñëóæáû õðîìàòîãðàôè÷åñêèõ êîëîíîê.

Õðîìàòîãðàììà ðàçäåëåíèÿ âèòàìèíîâ, èçâëå÷åííûõ èç ñûâîðîòêè ÷åëîâå÷å-

ñêîé êðîâè è ðàñòâîðèìûõ â âîäå è æèðå (êîíöåíòðàöèÿ 3 ìêã/ìë) â ïàòðîíå ñ

ìîäèôèöèðîâàííûì ñèëèêàãåëåì Bond Elut C8, ïðèâåäåíà íà ðèñ. IV.28.

Ñ öåëüþ ìîíèòîðèíãà íåéðîëåïòè÷åñêîãî ëåêàðñòâà êëîçàïèí â ïëàçìå êðîâè

÷åëîâåêà åãî èçâëåêàëè èç ìàòðèöû ìåòîäîì ÒÔÌÝ (ñì. ðàçäåë 2.4 â ãëàâå II) â

øïðèöå ñ êâàðöåâûì âîëîêíîì, ïîêðûòîì ïîëèäèìåòèëñèëîêñàíîì, â òå÷åíèå

30 ìèí [119]. Çàòåì âîëîêíî ïðîìûâàëè âîäîé è 50%-íûì ìåòàíîëîì, âûñóøèâà-

ëè è äåñîðáèðîâàëè àíàëèò â èñïàðèòåëü ãàçîâîãî õðîìàòîãðàôà (260°Ñ) â òå÷åíèå

60 ñ. Òàêîãî ðîäà ïðîáîïîäãîòîâêà ñ ïðèìåíåíèåì ÒÔÌÝ ñóùåñòâåííî ïðîùå è

ýôôåêòèâíåå äðóãèõ ñïîñîáîâ èçâëå÷åíèÿ ëåêàðñòâåííûõ ïðåïàðàòîâ èç áèîñóáñò-

ðàòîâ, îäíàêî ïðè êîëè÷åñòâåííûõ îïðåäåëåíèé âîñïðîèçâîäèìîñòü ýòîãî ñïîñî-

áà âûäåëåíèÿ àíàëèòà èç ìàòðèöû îñòàâëÿåò æåëàòü ëó÷øåãî (ñì. ãëàâó II).

Ðàçäåëåíèå ýíàíòèîìåðîâ. Ýíàíòèîìåðíûå èëè õèðàëüíûå ñîåäèíåíèÿ øèðîêî

ðàñïðîñòðàíåíû â ïðèðîäå. Ìíîãèå ñèíòåòè÷åñêèå ôàðìàöåâòè÷åñêèå ñîåäèíåíèÿ

îáëàäàþò õèðàëüíîñòüþ. Îáû÷íî ôèçèîëîãè÷åñêè àêòèâåí òîëüêî îäèí ñòåðåîèçî-

ìåð (îïòè÷åñêèé èçîìåð), à âòîðîé èíåðòåí èëè äàæå òîêñè÷åí. Î÷åíü âàæíî îïðåäå-

ëÿòü ýíàíòèîìåðíóþ ÷èñòîòó íåêîòîðûõ ëåêàðñòâ. Ýíàíòèñåëåêòèâíàÿ êàïèëëÿðíàÿ

õðîìàòîãðàôèÿ, ïðèìåíÿåòñÿ äëÿ îïðåäåëåíèÿ ïîäëèííîñòè ðÿäà ïèùåâûõ ïðîäóê-

òîâ è âèí [109] (ñì. ãëàâó V).

Äëÿ ðàçäåëåíèÿ ýíàíòèîìåðîâ íåïîäâèæíàÿ ôàçà äîëæíà áûòü òàêæå îïòè÷å-

Ëåêàðñòâà 679

Ðèñ. IV.26. Îïðåäåëåíèå ìîðôèíà

è åãî ìåòàáîëèòîâ â ýêñòðàêòå èç

ïëàçìû êðîâè ìåòîäîì ÂÝÆÕ ñ

ýëåêòðîõèìè÷åñêèì è ôëóîðåñöåí-

òíûì äåòåêòîðàìè [45]. Ïîÿñíåíèÿ

â òåêñòå.

ñêè àêòèâíîé, ò. å. èìåòü àñèììåòðè÷íûå, õèðàëüíûå öåíòðû. Âïåðâûå ïðèìåð

ïðèìåíåíèÿ îïòè÷åñêè àêòèâíîé íåïîäâèæíîé ôàçû îïèñàë Ãèëü-Àâ â 1966 ã.

Â íàñòîÿùåå âðåìÿ ïðåäëîæåíû îïòè÷åñêè àêòèâíûå íåïîäâèæíûå ôàçû ðàçíîé

ïðèðîäû â òîì ÷èñëå àìèäíûå, ïåïòèäíûå, æèäêîêðèñòàëëè÷åñêèå, öèêëîäåêñò-

ðèíîâûå íåïîäâèæíûå ôàçû, à òàêæå ñòàöèîíàðíûå ôàçû íà îñíîâå îïòè÷åñêè

àêòèâíûõ ìåòàëëîêîìïëåêñîâ [133, 134].

Ïîñëå ýêñòðàêöèîííîãî èçâëå÷åíèÿ èç áèîëîãè÷åñêèõ æèäêîñòåé ëåêàðñò-

âà (ýíàíòèîìåðû) àíàëèçèðóþò ìåòîäîì ãàçîâîé õðîìàòîãðàôèè, ÂÝÆÕ èëè ñ

ïîìîùüþ êàïèëëÿðíîãî ýëåêòðîôîðåçà. Íà ðèñ. IV.29 ïðèâåäåíà ýëåêòðîôîðåã-

ðàììà 4 ëåêàðñòâåííûõ ïðåïàðàòîâ, ïîëó÷åííàÿ íà êàïèëëÿðå èç ïëàâëåííîãî

êâàðöà (56/64,5 ñì õ 50 ìêì) â áóôåðíîì ðàñòâîðå (50 ìÌ ôîñôàòà, ðÍ=2,4) ñ 20

ìÌ äèìåòèë-·-öèêëîäåêñòðèíà ïðè 15°Ñ ñ ÓÔ-äåòåêòîðîì (200/10 íì). Íàïðÿæå-

íèå 30 êÂ, èíúåêöèÿ 100 ìÁàð/ñ. Ïðîáà 10 ìã/ìë [45].

680 Ãëàâà IV. Áèîñðåä

Ðèñ. IV.27. Õðîìàòîãðàììà ýêñòðàêòà íàðêîòèêîâ (À), ïîëó÷åííàÿ íà õðîìàòîãðàôå

Öâåò-500 Ì ñ ïîëèêàïèëëÿðíûìè êîëîíêàìè [127]. Ïîÿñíåíèÿ â òåêñòå. Á — ïó÷îê

ïîëèêàïèëëÿðíûõ êîëîíîê.

Ðèñ. IV.28. Õðîìàòîãðàììà

âèòàìèíîâ, èçâëå÷åííûõ èç ñûâî-

ðîòêè ÷åëîâå÷åñêîé êðîâè ìåòî-

äîì ÒÔÝ (âíèçó) [63]. Õðîìàòî-

ãðàììà ñòàíäàðòîâ (ââåðõó).

5. Ñòàíäàðòíûå ìåòîäèêè

Â íåäàâíî îïóáëèêîâàííîì ñáîðíèêå ìåòîäè÷åñêèõ óêàçàíèé ïî àíàëèçó áèîëîãè-

÷åñêèõ ñðåä [42] ïðèâîäèòñÿ 17 îôèöèàëüíûõ (èç Ðîññèè) ìåòîäèê îïðåäåëåíèÿ

ìåòàëëîâ, óãëåâîäîðîäîâ, àðîìàòè÷åñêèõ àìèíîñîåäèíåíèé, ôåíîëà, ôîðìàëü-

äåãèäà, ñïèðòîâ è äðóãèõ òîêñè÷íûõ âåùåñòâ â êðîâè, ìî÷å, æåë÷è, âîëîñàõ è

æåíñêîì ìîëîêå ñ ïîìîùüþ ãàçîâîé õðîìàòîãðàôèè, ÂÝÆÕ, ÀÀÑ è ýëåêòðîõè-

ìè÷åñêèõ ìåòîäîâ.

Ðàíåå (ñì. ðàçäåëû 1.1 è 2) óæå óïîìèíàëèñü ñòàíäàðòíûå (îôèöèàëüíûå) ìåòî-

äèêè îïðåäåëåíèÿ ìåòàëëîâ â æåë÷è è âîëîñàõ [42]. Íèæå ïðèâîäÿòñÿ ñòàíäàðòíûå

ðîññèéñêèå ìåòîäèêè îïðåäåëåíèÿ ñïèðòîâ Ñ

–Ñ

â êðîâè, àðîìàòè÷åñêèõ àìèíîñî-

åäèíåíèé â ìî÷å è àðîìàòè÷åñêèõ óãëåâîäîðîäîâ â êðîâè [42].

5.1. Ãàçîõðîìàòîãðàôè÷åñêîå îïðåäåëåíèå êîíöåíòðàöèé ìåòèëîâî-

ãî, ýòèëîâîãî, èçîïðîïèëîâîãî, ïðîïèëîâîãî, èçîáóòèëîâîãî è áóòè-

ëîâîãî ñïèðòîâ â êðîâè (ÌÓÊ 4.1.772-99) [42]

Ìåòîäèêà îáåñïå÷èâàåò âûïîëíåíèå èçìåðåíèé ñ ñóììàðíîé ïîãðåøíîñòüþ

ðåçóëüòàòà èçìåðåíèé ïðè äîâåðèòåëüíîé âåðîÿòíîñòè 0,95:

ìåòàíîë 23,6%,

ýòàíîë 13,4%,

èçîïðîïàíîë 24,2%,

ïðîïàíîë 22,2%,

èçîáóòàíîë 24,0%,

áóòàíîë 20,4%.

Ëåêàðñòâà 681

Ðèñ. IV.29. Ýëåêòðîôîðåãðàììà ôàðìàöåâòè÷åñêèõ ïðåïàðàòîâ, ïîëó÷åííàÿ (ïîñëå èõ

èçâëå÷åíèÿ èç áèîñóáñòðàòà) ìåòîäîì êàïèëëÿðíîãî ýëåêòðîôîðåçà [45].

Ñóùíîñòü ìåòîäà

Ìåòîäèêà îñíîâàíà íà ïðåäâàðèòåëüíîì âûäåëåíèè ñïèðòîâ èç áèîëîãè÷åñêîãî

ìàòåðèàëà ïóòåì íàãðåâàíèÿ îáúåêòà â ãåðìåòè÷íîì îáúåìå ñ ïîñëåäóþùèì ãàçî-

õðîìàòîãðàôè÷åñêèì àíàëèçîì ðàâíîâåñíîé ïàðîâîé ôàçû íàä æèäêîé ïðîáîé.

Èçìåðåíèå êîíöåíòðàöèè ìåòèëîâîãî, ýòèëîâîãî, ïðîïèëîâîãî, èçîïðîïèëî-

âîãî, áóòèëîâîãî è èçîáóòèëîâîãî ñïèðòîâ âûïîëíÿþò ìåòîäîì ãàçîâîé õðîìàòîã-

ðàôèè ñ ïëàìåííî-èîíèçàöèîííûì äåòåêòèðîâàíèåì.

Íèæíèé ïðåäåë èçìåðåíèÿ â îáúåìå ïðîáû:

ìåòàíîë 0,016 ìêã,

ýòàíîë 0,010 ìêã,

èçîïðîïàíîë 0,005 ìêã,

ïðîïàíîë 0,005 ìêã,

èçîáóòàíîë 0,003 ìêã,

áóòàíîë 0,003 ìêã.

Îïðåäåëåíèþ íå ìåøàþò àðîìàòè÷åñêèå óãëåâîäîðîäû, ñïèðòû, àëüäåãèäû,

êàðáîíîâûå êèñëîòû è äðóãèå îðãàíè÷åñêèå ñîåäèíåíèÿ.

Äëèòåëüíîñòü àíàëèçà, âêëþ÷àÿ ïîäãîòîâêó ïðîáû, — 40 ìèí.

Ñðåäñòâà èçìåðåíèé, âñïîìîãàòåëüíûå óñòðîéñòâà, ðåàêòèâû

Ïðè âûïîëíåíèè àíàëèçà ïðèìåíÿþò ñëåäóþùèå ñðåäñòâà èçìåðåíèé, âñïîìîãà-

òåëüíûå óñòðîéñòâà, ìàòåðèàëû è ðåàêòèâû.

Ñðåäñòâà èçìåðåíèé

Ãàçîâûé õðîìàòîãðàô ñåðèè «Öâåò-500» ñ äåòåêòîðîì èîíèçàöèè â ïëàìåíè

(ÏÈÄ) èëè äðóãèå ñ àíàëîãè÷íûìè èëè ëó÷øèìè õàðàêòåðèñòèêàìè

Âåñû ëàáîðàòîðíûå ÂËÐ-200 àíàëèòè÷åñêèå ÃÎÑÒ 24104-80Å

Ðàçíîâåñû Ã

-210 ÃÎÑÒ 73208-82

Òåðìîìåòð ëàáîðàòîðíûé ÒË-2, ïðåäåëû 0–100°Ñ,

öåíà äåëåíèÿ –1°Ñ ÒÓ 25-2021-003-88

Ñåêóíäîìåð «Àãàò» ÃÎÑÒ 5072-79

Øïðèö ìåäèöèíñêèé ñòåêëÿííûé

âìåñòèìîñòüþ 5 ñì

ÒÓ 64-1-378-83

Ìèêðîøïðèöû âìåñòèìîñòüþ 10 ìì

è 100 ìì

ÒÓ 2.833.104

Ëóïà èçìåðèòåëüíàÿ ÃÎÑÒ 25706-83

Ëèíåéêà ìåòàëëè÷åñêàÿ èçìåðèòåëüíàÿ,

öåíà äåëåíèÿ 1 ìì ÃÎÑÒ 17435-72

Êîëáà ìåðíàÿ âìåñòèìîñòüþ 1000 ñì

ÃÎÑÒ 1770-74

Ñòåêëÿííûé ñîñóä âìåñòèìîñòüþ 30-40 ñì

ñ ãåðìåòè÷íî çàêðûâàþùåéñÿ êðûøêîé

Âñïîìîãàòåëüíûå óñòðîéñòâà

Õðîìàòîãðàôè÷åñêàÿ êîëîíêà ñòåêëÿííàÿ äëèíîé 200 ñì âíóòðåííèì äèàìåòðîì

682 Ãëàâà IV. Áèîñðåä

2 ìì

Äèñòèëëÿòîð ÒÓ 61-1-721-79

Âîäÿíàÿ áàíÿ

Ðåäóêòîð êèñëîðîäíûé ÒÓ 26-05-235-70

Ìàòåðèàëû

Ãåëèé â áàëëîíå ÒÓ 51-940-88

Âîäîðîä òåõíè÷åñêèé ÃÎÑÒ 3022-80

Ðåàêòèâû

Ìåòàíîë äëÿ õðîìàòîãðàôèè, õ.÷. ÒÓ6-09-1709-77

Ýòàíîë äëÿ õðîìàòîãðàôèè, ðåêòèôèêàò ÒÓ 6-09-1710-77

Ïðîïàíîë-1 äëÿ õðîìàòîãðàôèè, õ.÷. ÒÓ 6-09-783-76

Èçîïðîïèëîâûé ñïèðò äëÿ õðîìàòîãðàôèè, õ.÷. ÒÓ 6-09-4522-77

Áóòàíîë-1 äëÿ õðîìàòîãðàôèè, õ.÷. ÒÓ 6-09-4522-77

Èçîáóòèëîâûé ñïèðò, î÷èùåííûé äëÿ õðîìàòîãðàôèè,

÷èñòîòà 99%

Ïîëèñîðá-1, íîñèòåëü äëÿ ãàçîâîé õðîìàòîãðàôèè,

ôðàêöèè 0,125-0,150 ìì, îáðàáîòàííûé 5%

íåïîäâèæíîé æèäêîé ôàçû ïîëèýòèëåíãëèêîëü

3000 (ÏÝÃ 3000)

Âîäà äèñòèëëèðîâàííàÿ ÃÎÑÒ 6709-72

Ïîäãîòîâêà ê âûïîëíåíèþ èçìåðåíèé

Ïåðåä âûïîëíåíèåì èçìåðåíèé ïðîâîäÿò ñëåäóþùèå ðàáîòû: ïîäãîòîâêà õðîìà-

òîãðàôè÷åñêîé êîëîíêè, ïðèãîòîâëåíèå ñòàíäàðòíûõ ñìåñåé, óñòàíîâëåíèå ãðàäó-

èðîâî÷íîé õàðàêòåðèñòèêè.

Ïîäãîòîâêà õðîìàòîãðàôè÷åñêîé êîëîíêè

Õðîìàòîãðàôè÷åñêóþ êîëîíêó ïåðåä çàïîëíåíèåì íåïîäâèæíîé ôàçîé ïðîìû-

âàþò äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé, àöåòîíîì, ãåêñàíîì, âûñóøèâàþò â òîêå èíåð-

òíîãî ãàçà. Çàïîëíåíèå õðîìàòîãðàôè÷åñêîé êîëîíêè íàñàäêîé ïðîâîäÿò ïîä

âàêóóìîì. Êîíöû êîëîíêè çàêðûâàþò ñòåêëîâàòîé è, íå ïîäêëþ÷àÿ ê äåòåêòîðó,

êîíäèöèîíèðóþò â òîêå ãàçà-íîñèòåëÿ (ãåëèÿ) ñ ðàñõîäîì 30 ñì

/ìèí ïðè òåìïå-

ðàòóðå 150°Ñ â òå÷åíèå 18 ÷. Ïîñëå îõëàæäåíèÿ êîëîíêó ïîäêëþ÷àþò ê äåòåêòîðó,

çàïèñûâàþò íóëåâóþ ëèíèþ â ðàáî÷åì ðåæèìå. Ïðè îòñóòñòâèè ìåøàþùèõ âëèÿ-

íèé êîëîíêà ãîòîâà ê ðàáîòå.

Ïðèãîòîâëåíèå ñòàíäàðòíûõ ñìåñåé

Èñõîäíûé ñòàíäàðòíûé ðàñòâîð äëÿ ãðàäóèðîâêè. Â êîëáó âìåñòèìîñòüþ 1000 ñì

ââîäÿò ìèêðîøïðèöåì ïî 10 ìì

ìåòèëîâîãî, ýòèëîâîãî, ïðîïèëîâîãî, èçîïðî-

ïèëîâîãî, áóòèëîâîãî è èçîáóòèëîâîãî ñïèðòîâ è äîâîäÿò âîäîé äî ìåòêè. Ñîäåð-

Ñòàíäàðòíûå ìåòîäèêè 683