Другов Ю.С., Родин А.А. Пробоподготовка в экологическом анализе

Подождите немного. Документ загружается.

÷àñòî ñêàðìëèâàþòñÿ íèòðîôóðàíîâûå è ñóëüôàíèëàìèäíûå ïðåïàðàòû (òàêèå,

êàê ñóëüôàïèðèäèí, åãî N-àöåòèëîâûé ìåòàáîëèò, ýòîïàáàò, õëîðàìôåíèêîë,

ìèòèêëîðïèíäîë, ìåòðîíèäàçîë, èïðîíèäàçîë, ôóðàçîëèäîí è íèêàðáàçèí).

Ñîâðåìåííîå èíòåíñèâíîå ðàçâåäåíèå äîìàøíåãî ñêîòà òðåáóåò ïîñòîÿííîé

áîðüáû ñ çàáîëåâàíèÿìè, âûçâàííûìè âèðóñàìè, áàêòåðèÿìè, ïðîòîçîéíûìè è

(èëè) ãðèáêîâûìè ìèêðîîðãàíèçìàìè. Èìååòñÿ öåëûé ðÿä õèìèîòåðàïåâòè÷å-

ñêèõ ñðåäñòâ, èñïîëüçóåìûõ äëÿ ïðîôèëàêòèêè è áîðüáû ñ òàêèìè çàáîëåâàíè-

ÿìè. Ïîñëå ëå÷åíèÿ îñòàòî÷íûå êîëè÷åñòâà ýòèõ ñðåäñòâ ìîãóò îáíàðóæèâàòüñÿ

â ïèùåâûõ ïðîäóêòàõ æèâîòíîãî ïðîèñõîæäåíèÿ (òàêèõ, êàê ìîëîêî, ÿéöà è

ìÿñî). Òàêèå ñðåäñòâà ìîãóò âûçâàòü óñòîé÷èâîñòü áàêòåðèé. Èç-çà òîêñè÷íîñòè

õèìèîòåðàïåâòè÷åñêèõ ëåêàðñòâåííûõ ïðåïàðàòîâ (íàïðèìåð, õëîðàìôåíèêîëà),

îôèöèàëüíûå îðãàíû ìíîãèõ ñòðàí (âêëþ÷àÿ ÑØÀ, Ãåðìàíèþ è ßïîíèþ) ââåëè

îãðàíè÷åíèÿ íà îñòàòî÷íûå êîëè÷åñòâà ýòèõ âåùåñòâ.

Äëÿ îáíàðóæåíèÿ è êîëè÷åñòâåííîãî àíàëèçà îñòàòêîâ õèìèîòåðàïåâòè÷åñêèõ

è ïðîòèâîïàðàçèòíûõ ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ â ïèùåâûõ ïðîäóêòàõ òðåáóþòñÿ

ïðîñòûå è íàäåæíûå ìåòîäû àíàëèçà. Ìàëèø ñ ñîàâòîðàìè ðàçðàáîòàëè ìåòîä

âûñîêîýôôåêòèâíîé æèäêîñòíîé õðîìàòîãðàôèè, äàþùèé âîçìîæíîñòü ðåãèñò-

ðàöèè 11 òàêèõ âåùåñòâ [55]. Â êà÷åñòâå âíóòðåííèõ ñòàíäàðòîâ èñïîëüçóþòñÿ

áåíçîòèàçóðîí è ïèðàçîí.

Ïîäãîòîâêà îáðàçöà

Ïîñëå ãîìîãåíèçèðîâàíèÿ èëè ïðîïóñêàíèÿ ÷åðåç ìÿñîðóáêó è äîâîäêè ðÍ ïðî-

èçâîäèòñÿ æèäêî-æèäêîñòíîå ýêñòðàãèðîâàíèå; çàòåì óäàëÿþò æèð, ïðîâîäÿò

äîïîëíèòåëüíóþ î÷èñòêó è êîíöåíòðèðóþò.

Óñëîâèÿ õðîìàòîãðàôè÷åñêîãî àíàëèçà

Ïðîèëëþñòðèðîâàííûé çäåñü ìåòîä ïðèãîäåí äëÿ àíàëèçà ñîäåðæàíèÿ îñòàòî÷íûõ

êîëè÷åñòâ ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ â ÿéöàõ, ìîëîêå è ìÿñå. Ïîëüçîâàëèñü õðîìàòîã-

ðàôè÷åñêèì ðàçäåëåíèåì íà êîëîíêå ñ îáðàùåííîé ôàçîé è ìíîãîêàíàëüíîé ðåãè-

ñòðàöèåé ñ ïîìîùüþ äåòåêòîðà ñ äèîäíîé ìàòðèöåé. Îïîçíàíèå ïðîâîäèëîñü ïî

âðåìåíè óäåðæèâàíèÿ è ïî ñïåêòðàëüíûì äàííûì.

Ïîäãîòîâêà îáðàçöà: ñîãëàñíî ìåòîäó, îïèñàííîìó â ïóáëèêàöèè [55]. Êîëîí-

êà: Spherisorb ODS-2 (250 x 4,6 ìì; ðàçìåð ÷àñòèö 5 ìèêðîí)

Ïîäâèæíàÿ ôàçà: À — 0,02 í ðàñòâîð àöåòàòà íàòðèÿ; ðÍ 4,8

Â — ñìåñü àöåòîíèòðèëà ñ âîäîé (60:40)

Ãðàäèåíò: íà÷àëî ñ 8% Â

íà 5 ìèí 8% Â

íà 7 ìèí 20% Â

íà 14 ìèí 23% Â

íà 16 ìèí 33% Â

íà 19 ìèí 40% Â

íà 21 ìèí 50% Â

íà 26 ìèí 60% Â

íà 30 ìèí 80% Â

724 Ãëàâà V. Ïèùåâûå ïðîäóêò

íà 33 ìèí 90% Â

íà 43 ìèí 90% Â

íà 55 ìèí 8% Â

Ñêîðîñòü ïðîòîêà: 1,5 ìë/ìèí

Ââîäèìûé îáúåì: 20 ìêë

Äåòåêòîð: ñ äèîäíîé ìàòðèöåé (îáíàðóæåíèå íà äëèíàõ âîëí 275 íì

ïðè øèðèíå ïîëîñû 80 íì; 315 íì ïðè øèðèíå ïîëîñû

80 íì; 360 íì ïðè øèðèíå ïîëîñû 80 íì; êîíòðîëüíàÿ äëèíà

âîëíû 500 íì, øèðèíà ïîëîñû 100 íì) — ðèñ. V.19.

Ýôôåêòèâíîñòü ðàññìàòðèâàåìîãî õðîìàòîãðàôè÷åñêîãî ìåòîäà

Ïðåäåë îáíàðóæåíèÿ: 0,001-0,05 ìã/êã

Ïîãðåøíîñòü âðåìåíè óäåðæèâàíèÿ çà 10 ðàçãîíîê: ìåíåå 0,12%

Ïîãðåøíîñòü ïëîùàäè ïèêîâ çà 10 ðàçãîíîê: ìåíåå 1,5%

2.3.2. Ëåêàðñòâåííûå ïðåïàðàòû òåòðàöèêëèíîâîãî ðÿäà

Ëåêàðñòâåííûå ñîåäèíåíèÿ òåòðàöèêëèíîâîãî ðÿäà âî âñåì ìèðå øèðîêî èñïîëü-

çóþòñÿ â âèäå äîáàâîê ê êîðìó æèâîòíûõ. Ó æèâîòíûõ, ìÿñî êîòîðûõ èñïîëüçóåòñÿ

â ïèùåâûõ ïðîäóêòàõ, òàêèå ëåêàðñòâåííûå ïðåïàðàòû îêàçûâàþòñÿ âåñüìà àêòèâ-

íûìè ïî îòíîøåíèþ ê øèðîêîìó ñïåêòðó áàêòåðèé [55, 56].

Ïîäãîòîâêà îáðàçöà

Ïîñëå ãîìîãåíèçèðîâàíèÿ èëè ïðîïóñêàíèÿ ÷åðåç ìÿñîðóáêó è äîáàâëåíèÿ ìèíå-

ðàëüíûõ êèñëîò äëÿ îòùåïëåíèÿ òåòðàöèêëèíîâ îò áåëêîâ, ïðîèçâîäèòñÿ æèä-

êî-æèäêîñòíîå ýêñòðàãèðîâàíèå; çàòåì óäàëÿþò æèð, ïðîâîäÿò äîïîëíèòåëüíóþ

î÷èñòêó è êîíöåíòðèðóþò [57].

Ñòàíäàðòíûå çàðóáåæíûå ìåòîäèêè 725

Ðèñ. V.19. Àíàëèç îñòàòî÷íûõ êîëè÷åñòâ ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ â ÿéöàõ. Îïîçíàíèå îáåñ-

ïå÷åíî áëàãîäàðÿ áèáëèîòå÷íîìó ïîèñêó. Íà ðèñ. V.20 ïîêàçàíû ïîäâòåðæäàþùèå ñïåêò-

ðîãðàììû ñóëüôàïèðèäèíà è ïèðàçîíà. Ñîîòâåòñòâèå ïèêîâ:

1 — ìåòðîíèäàçîë 7 — õëîðàìôåíèêîë

2 — ìèòèêëîðïèíäîë 8 — N-àöåòèëüíûé ìåòàáîëèò ñóëüôàïèðèäèíà

3 — ñóëüôàïèðèäèí 9 — 3-ýòîïàáàò

4 — ôóðàçîëèäîí 10 — áåíçîòèàçóðîí

5 — ïèðàçîí 11 — íèêàðáàçèí

6 — èïðîíèäàçîë

Óñëîâèÿ õðîìàòîãðàôè÷åñêîãî àíàëèçà

Ïðîèëëþñòðèðîâàííûé çäåñü ìåòîä âûñîêîýôôåêòèâíîé æèäêîñòíîé õðîìàòîã-

ðàôèè ïðåäóñìàòðèâàåò ðàçäåëåíèå íà êîëîíêå ñ îáðàùåííîé ôàçîé è ðåãèñò-

ðàöèþ ñ ïîìîùüþ äåòåêòîðà ñ äèîäíîé ìàòðèöåé. Îïîçíàíèå ïðîâîäèëîñü ïî

âðåìåíè óäåðæèâàíèÿ è ïî ñïåêòðàëüíûì äàííûì.

Ïîäãîòîâêà îáðàçöà: 1 ã. îáðàçöà ñìåøèâàþò ñ 100 ìã ëèìîííîé êèñëîòû; ïîñëå

ýòîãî äîáàâëÿþò 1 ìë àçîòíîé êèñëîòû (30%) èëè 0,1 Ì ðàñ-

òâîð ùàâåëåâîé êèñëîòû; çàòåì, äîáàâëÿþò 4 ìë ìåòàíîëà è

ïîìåùàþò ñìåñü íà 5 ìèí â óëüòðàçâóêîâóþ áàíþ; ïîñëå ýòîãî,

äîâîäÿò îáùèé îáúåì äî 10 ìë âîäîé; çàòåì öåíòðèôóãèðóþò;

ñóïåðíàòàíò ââîäÿò â õðîìàòîãðàô.

Êîëîíêà: Hypersil BDS (100 × 4 ìì; ðàçìåð ÷àñòèö 3 ìèêðîíà)

Ïîäâèæíàÿ ôàçà: À — âîäà; ðÍ 2,1 (äîâîäêà ñåðíîé êèñëîòîé)

Â — àöåòîíèòðèë

Ãðàäèåíò: íà÷àëî ñ 15% Â

íà 10 ìèí 60% Â

Ñêîðîñòü ïðîòîêà: 0,5 ìë/ìèí

Òåìïåðàòóðà êîëîíêè: 25°Ñ

Äåòåêòîð: ñ äèîäíîé ìàòðèöåé (îáíàðóæåíèå íà äëèíå âîëíû 355

íì ïðè øèðèíå ïîëîñû 20 íì; êîíòðîëüíàÿ äëèíà âîëíû

600 íì, øèðèíà ïîëîñû 100 íì) — ðèñ. V.21-A è V.21-B.

Ýôôåêòèâíîñòü ðàññìàòðèâàåìîãî õðîìàòîãðàôè÷åñêîãî ìåòîäà

Ïðåäåë îáíàðóæåíèÿ: 100 ìêã/êã

Ïîãðåøíîñòü âðåìåíè óäåðæèâàíèÿ çà 10 ðàçãîíîê: ìåíåå 0,2%

Ïîãðåøíîñòü ïëîùàäè ïèêîâ çà 10 ðàçãîíîê: ìåíåå 2%

2.3.3. Ìèêîòîêñèíû

Àíàëèçèðîâàëîñü ñîäåðæàíèå ñëåäóþùèõ ìèêîòîêñèíîâ: àôëàòîêñèíîâ G

, G

, B

, M

è M

, îõðàòîêñèí À, çåàðàëåíîí è ïàòóëèí.

Ìèêîòîêñèíû — ñèëüíî òîêñè÷íûå âåùåñòâà, âûðàáàòûâàåìûå ãðèáàìè. Îíè

ìîãóò çàãðÿçíÿòü ïèùåâûå ïðîäóêòû è ïðîäîâîëüñòâåííîå ñûðüå, åñëè óñëîâèÿ

õðàíåíèÿ áëàãîïðèÿòíû äëÿ ðîñòà ãðèáîâ. Ýòè òîêñèíû õàðàêòåðèçóþòñÿ îòíîñè-

òåëüíî âûñîêîé ìîëåêóëÿðíîé ìàññîé è ñîäåðæàò îäíî èëè íåñêîëüêî îêñèãåíè-

726 Ãëàâà V. Ïèùåâûå ïðîäóêò

Ðèñ. V.20. Ïîäòâåðæäàþùèå ñïåêòðîãðàììû.

ðîâàííûõ àëèöèêëè÷åñêèõ êîëåö. Àíàëèç èíäèâèäóàëüíûõ ìèêîòîêñèíîâ è èõ

ìåòàáîëèòîâ ñëîæåí, ïîñêîëüêó èçâåñòíû áîëåå 100 òàêèõ âåùåñòâ è âåðîÿòíî,

÷òî ëèøü îäèí òîêñèí ïðèñóòñòâóåò â êðàéíå íèçêîì êîëè÷åñòâå â îáðàçöå, õàðàê-

òåðèçóþùåìñÿ âåñüìà ñëîæíîé îðãàíè÷åñêîé ìàòðèöåé. Ñîäåðæàíèå áîëüøèíñò-

âà ìèêîòîêñèíîâ èññëåäóåòñÿ ñ ïîìîùüþ òîíêîñëîéíîé õðîìàòîãðàôèè. Îäíà-

êî, áîëåå âûñîêàÿ ðàçäåëèòåëüíàÿ ñïîñîáíîñòü è ìåíüøèå çàòðàòû íà àíàëèç,

òèïè÷íûå äëÿ âûñîêîýôôåêòèâíîé æèäêîñòíîé õðîìàòîãðàôèè, äåëàþò èìåííî

ýòîò ìåòîä áîëåå ïîïóëÿðíûì. Íåîáõîäèìûå óðîâíè îáíàðóæåíèÿ ñîñòàâëÿþò

íåñêîëüêî ìêã/êã [58, 59] è ìîãóò áûòü äîñòèãíóòû áëàãîäàðÿ ïîëüçîâàíèþ ïîäõî-

äÿùèì ìåòîäîì êîíöåíòðèðîâàíèÿ îáðàçöà è ÷óâñòâèòåëüíûì äåòåêòîðîì.

Ïîäãîòîâêà îáðàçöà

Ïîäãîòîâêó îáðàçöà ïðîèçâîäÿò ñîãëàñíî óòâåðæäåííûì (ãîñòèðîâàííûì) ìåòî-

äàì [59]. Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñîäåðæàíèÿ ðàçëè÷íûõ êëàññîâ âåùåñòâ, ïðèõîäèòñÿ

ïîëüçîâàòüñÿ ðàçíûìè ïîäõîäàìè ê ïîäãîòîâêå îáðàçöà è ðàçíûìè óñëîâèÿìè ðàç-

äåëåíèÿ â æèäêîñòíîì õðîìàòîãðàôå. Ïðèâîäèìàÿ äàëåå òàáë. V.4 äàåò êðàòêóþ

ñâîäêó ñïîñîáîâ ïîäãîòîâêè îáðàçöîâ è óñëîâèé àíàëèçà ñîäåðæàíèÿ ìèêîòîêñè-

íîâ â ïèùåâûõ ïðîäóêòàõ.

Óñëîâèÿ õðîìàòîãðàôè÷åñêîãî àíàëèçà

Ïðîèëëþñòðèðîâàííûé çäåñü ìåòîä âûñîêîýôôåêòèâíîé æèäêîñòíîé õðîìàòîã-

ðàôèè ïðèãîäåí äëÿ àíàëèçà ñîäåðæàíèÿ ìèêîòîêñèíîâ â îðåõàõ, ïðÿíîñòÿõ,

êîðìå äëÿ æèâîòíûõ, ìóêå, èíæèðå è ïðîäóêòàõ èç ÿáëîê. Ðàçäåëåíèå ïðîèçâî-

äèòñÿ íà êîëîíêå ñ îáðàùåííîé ôàçîé, à äëÿ ðåãèñòðàöèè èñïîëüçóþòñÿ äåòåêòîð

Ñòàíäàðòíûå çàðóáåæíûå ìåòîäèêè 727

Ðèñ. V.21-A. Àíàëèç îñòàòî÷-

íûõ êîëè÷åñòâ (ìèêðîïðè-

ìåñåé) òåòðàöèêëèíà â ìÿñå.

Îïîçíàíèþ îêñèòåòðàöèêëèíà

ñïîñîáñòâîâàë áèáëèîòå÷íûé

ïîèñê. Íà ðèñ. V.21B ïîêàçà-

ëà ïîäòâåðæäàþùàÿ ñïåêòðîã-

ðàììà.

Ðèñ. V.21-B. Ïîäòâåðæäàþùàÿ ñïåêòðîã-

ðàììà

ñ äèîäíîé ìàòðèöåé è ôëóîðèìåòðè÷åñêèé äåòåêòîð. Îïîçíàíèå ïðîâîäèëîñü ïî

âðåìåíè óäåðæèâàíèÿ è ïî ñïåêòðàëüíûìè äàííûì (ðèñ. V.22 è V.23).

Òàáëèöà V.4. Îïðåäåëåíèå ìèêîòîêñèíîâ [2]

Êëàññ âåùåñòâ

Ìàòðèöà

Ïîäãîòîâêà

Óñëîâèÿ ðàçäåëåíèÿ

Àôëàòîêñèíû

, G

, B

, M

Îðåõè, ïðÿíîñòè,

êîðì äëÿ æèâîòíûõ,

ìîëîêî, ìîëî÷íûå

ïðîäóêòû

Ýêñòðàãèðîâàíèå ñîãëàñíî

[57]

Êîëîíêà Hypersil ODS (100 × 2,1 ìì;

ðàçìåð ÷àñòèö 3 ìèêðîíà)

Èçîêðàòè÷åñêîå ðàçäåëåíèå; ñîñòàâ

ïîäâèæíîé ôàçû: ñìåñü âîäû, ìåòàíî-

ëà è àöåòîíèòðèëà (63:26:11)

Ñêîðîñòü ïðîòîêà: 0,3 ìë/ìèí ïðè

25°Ñ

Äåòåêòîð ñ äèîäíîé ìàòðèöåé: îáíàðó-

æåíèå íà äëèíå âîëíû 365 íì ïðè øèðè-

íå ïîëîñû 20 íì

Ôëóîðèìåòðè÷åñêèé äåòåêòîð: âîçáóæ-

äàþùàÿ äëèíà âîëíû 365 íì; âîçáóæäåí-

íàÿ äëèíà âîëíû 455 íì

Îõðàòîêñèí À

Õëåáíûå çëàêè, ìóêà,

èíæèð

Ýêñòðàãèðîâàíèå ñîãëàñíî

[57]

Ïîäêèñëåíèå HCl

Ýêñòðàãèðîâàíèå òîëóîëîì

Î÷èñòêà íà êîëîíêå ñ ñèëèêà-

ãåëåì; ýëþèðîâàíèå ñìåñüþ

òîëóîëà ñ óêñóñíîé êèñëîòîé

(9:1)

Êîëîíêà Lichrospher 100 RP18 (125 × 4

ìì; ðàçìåð ÷àñòèö 5 ìèêðîí)

Ïîäâèæíàÿ ôàçà: ñìåñü âîäû, ñîäåðæà-

ùåé 2% óêñóñíîé êèñëîòû, è àöåòîíèò-

ðèëà (1:1)**

Ôëóîðèìåòðè÷åñêèé äåòåêòîð: âîçáóæ-

äàþùàÿ äëèíà âîëíû 347 íì; âîçáóæ-

äåííàÿ äëèíà âîëíû 480 íì

728 Ãëàâà V. Ïèùåâûå ïðîäóêò

Ðèñ. V.22. Àíàëèç ñîäåðæàíèÿ àôëàòîêñèíîâ ïðè îáíàðóæåíèè äåòåêòîðîì ñ äèîäíîé ìàò-

ðèöåé è ôëóîðèìåòðè÷åñêèì äåòåêòîðîì

Ðèñ. V.23. Àíàëèç ñîäåðæàíèÿ àôëàòîêñèíîâ â ôèñòàøêàõ ïðè îáíàðóæåíèè äåòåêòîðîì ñ

äèîäíîé ìàòðèöåé è ôëóîðèìåòðè÷åñêèì äåòåêòîðîì

Çåàðàëåíîí

Õëåáíûå çëàêè

Ýêñòðàãèðîâàíèå òîëóîëîì

Î÷èñòêà íà ïàòðîíå Seppak

Ýëþèðîâàíèå ñìåñüþ òîëóî-

ëà ñ àöåòîíîì (95:5)

Ïîäãîòîâêà ê àíàëèçó ·-

çåàðàëåíîëà è çåàðàëåíîíà

â êóêóðóçå ñîãëàñíî ÀÎÀÑ

985.18 [70]

Êîëîíêà Hypersil ODS (100 × 2,1 ìì;

ðàçìåð ÷àñòèö 3 ìèêðîíà)

Èçîêðàòè÷åñêîå ðàçäåëåíèå: ñîñòàâ

ïîäâèæíîé ôàçû: ñìåñü âîäû, ìåòàíî-

ëà è àöåòîíèòðèëà (5:4:1)**

Ñêîðîñòü ïðîòîêà 0,45 ìë/ìèí ïðè

45°Ñ

Äåòåêòîð ñ äèîäíîé ìàòðèöåé: îáíà-

ðóæåíèå íà äëèíå âîëíû 236 íì ïðè

øèðèíå ïîëîñû 20 íì

Ôëóîðèìåòðè÷åñêèé äåòåêòîð: âîç-

áóæäàþùàÿ äëèíà âîëíû 236 íì; âîç-

áóæäåííàÿ äëèíà âîëíû 464 íì

Ïàòóëèí

Ïðîäóêòû èç ÿáëîê

Î÷èñòêà íà ïàòðîíå Extrelut

Î÷èñòêà íà êîëîíêå ñ ñèëè-

êàãåëåì

Ýëþèðîâàíèå ñìåñüþ òîëóîëà

ñ ýòèëàöåòàòîì (3:1)

Êîëîíêà Superspher RP18 (125 × 4 ìì;

ðàçìåð ÷àñòèö 4 ìèêðîíà)

Ñìåñü âîäû ñ àöåòîíèòðèëîì (5%:

95%)

Ñêîðîñòü ïðîòîêà 0,6 ìë/ìèí ïðè

40°Ñ

Äåòåêòîð ñ äèîäíîé ìàòðèöåé: îáíà-

ðóæåíèå íà äëèíå âîëíû 270 íì ïðè

øèðèíå ïîëîñû 20 íì

èëè

Êîëîíêà Lichrospher DIOL (125 × 4

ìì; ðàçìåð ÷àñòèö 5 ìèêðîí)

Èçîêðàòè÷åñêîå ðàçäåëåíèå: ñîñòàâ

ïîäâèæíîé ôàçû: ñìåñü ãåêñàíà ñ èçî-

ïðîïàíîëîì (95:5)

Ñêîðîñòü ïðîòîêà 0,6 ìë/ìèí ïðè

30°Ñ

Äåòåêòîð ñ äèîäíîé ìàòðèöåé: îáíà-

ðóæåíèå íà äëèíå âîëíû 270 íì ïðè

øèðèíå ïîëîñû 20 íì

**Êîëîíêó ðåêîìåíäóåòñÿ ðåãåíåðèðîâàòü ÷èñòûì àöåòîíèòðèëîì

Ýôôåêòèâíîñòü ðàññìàòðèâàåìîãî õðîìàòîãðàôè÷åñêîãî ìåòîäà

Ïðåäåë îáíàðóæåíèÿ: 1–5 ìêã/êã

Ïîãðåøíñîòü âðåìåíè óäåðæèâàíèÿ çà 10 ðàçãîíîê: ìåíåå 0,12%

Ïîãðåøíîñòü ïëîùàäè ïèêîâ çà 10 ðàçãîíîê: ìåíåå 1,5%

Ëèíåéíîñòü:

ïðè ïîëüçîâàíèè äåòåêòîðîì ñ äèîäíîé ìàòðèöåé: â äèàïàçîíå îò 1 äî 500

íã

ïðè ïîëüçîâàíèè ôëóîðèìåòðè÷åñêèì äåòåêòîðîì: â äèàïàçîíå îò

30 ïêã äî 2 íã

2.3.4. Ïåñòèöèäû

Àíàëèçèðîâàëîñü ñîäåðæàíèå ïåñòèöèäîâ, îòíîñÿùèõñÿ ê ñëåäóþùèì êëàññàì:

òðèàçèíîâûå ïåñòèöèäû; ãåðáèöèäû íà îñíîâå ôåíèëìî÷åâèíû; ìåòàáåíçòèàçó-

ðîí; äèêâàò; ïàðàêâàò è ìåðêàïòîáåíçòèàçîë. Èññëåäîâàëîñü ñîäåðæàíèå êàðáà-

ìàòíûõ ïåñòèöèäîâ è ãëèôîñàòà (íî ïðè ïîëüçîâàíèè äðóãèì îáîðóäîâàíèåì).

Â áîëüøèíñòâå ñòðàí âñå áîëüøåå âíèìàíèå ïðèâëåêàåò ôàêò ïðèñóòñòâèÿ îñòà-

òî÷íûõ êîëè÷åñòâ ïåñòèöèäîâ â ïèùåâûõ ïðîäóêòàõ è ïðîäîâîëüñòâåííîì ñûðüå.

Ñòàíäàðòíûå çàðóáåæíûå ìåòîäèêè 729

Äëÿ çàùèòû ðûíêà îò ïîñòóïëåíèÿ çàãðÿçíåííûõ ïðîäóêòîâ ðàçðàáîòàíû íîðìà-

òèâû (ñòàíäàðòû), îãðàíè÷èâàþùèå äîïóñòèìóþ êîíöåíòðàöèþ ïåñòèöèäîâ. Àíà-

ëèç îáåñïå÷èâàåòñÿ ñ ïîìîùüþ ðÿäà ìåòîäîâ. Ïîëüçîâàòüñÿ âûñîêîýôôåêòèâíîé

æèäêîñòíîé õðîìàòîãðàôèåé ðåêîìåíäóåòñÿ â ñëó÷àå âåùåñòâ, õàðàêòåðèçóþùèõ-

ñÿ ìàëîé ëåòó÷åñòüþ èëè íå îáëàäàþùèõ ñòîéêîñòüþ ê íàãðåâó.

Ïîäãîòîâêà îáðàçöà

Ñïîñîáû ïîäãîòîâêè è êîíöåíòðèðîâàíèÿ îáðàçöîâ ñèëüíî çàâèñÿò îò ìàòðèöû.

Íàïðèìåð, îáðàáîòêà îáðàçöîâ ïèòüåâîé âîäû ñâîäèòñÿ ê òâåðäîôàçíîìó ýêñ-

òðàãèðîâàíèþ; èçâëå÷åíèå èç îâîùåé âûïîëíÿþò (ïîñëå ãîìîãåíèçèðîâàíèÿ)

ìåòîäîì æèäêî-æèäêîñòíîãî ýêñòðàãèðîâàíèÿ, ïîñëå êîòîðîãî èñïîëüçóþòñÿ

äîïîëíèòåëüíûå ýòàïû î÷èñòêè è êîíöåíòðèðîâàíèÿ.

Óñëîâèÿ õðîìàòîãðàôè÷åñêîãî àíàëèçà

Ïðîèëëþñòðèðîâàííûé çäåñü ìåòîä âûñîêîýôôåêòèâíîé æèäêîñòíîé õðîìàòîã-

ðàôèè èñïîëüçîâàëñÿ äëÿ àíàëèçà ñîäåðæàíèÿ ïåñòèöèäîâ â îáðàçöàõ ñàëàòà è

ïðÿíîñòåé [60, 61].

Ïîäãîòîâêà îáðàçöà: ñàëàò ãîìîãåíèçèðîâàëè, ïîñëå ÷åãî ïîëüçîâàëèñü

æèäêî-æèäêîñòíûì ýêñòðàãèðîâàíèåì. Î÷èñòêà ýêñòðàêòà ïðîèçâîäè-

ëàñü ñ ïîìîùüþ ãåëü-ïðîíèêàþùåé õðîìàòîãðàôèè ñ èñïîëüçîâàíèåì

ñìåñè öèêëîãåêñàíà ñ ýòèëàöåòàòîì. Ïîäãîòîâêà îáðàçöîâ ïðÿíîñòåé

îáåñïå÷èâàëàñü ñîãëàñíî ìåòîäó [62] (ïðèìåíÿëàñü ãåëü-ïðîíèêàþùàÿ

õðîìàòîãðàôèÿ) ñì. ðèñ. V.24 è V.25.

Êîëîíêà: Hypersil BDS (100 × 3 ìì; ðàçìåð ÷àñòèö 3 ìèêðîíà)

Ïîäâèæíàÿ ôàçà: À — ñìåñü âîäû ñ àöåòîíèòðèëîì (95:5)

Â — àöåòîíèòðèë

Ãðàäèåíò: íà 10 ìèí 25% àöåòîíèòðèëà

íà 26 ìèí 42% àöåòîíèòðèëà

íà 34 ìèí 60% àöåòîíèòðèëà

Ðåãåíåðèðîâàíèå êîëîíêè: 100% àöåòîíèòðèëà â òå÷åíèå 10 ìèí

Ïåðèîä ðåãåíåðèðîâàíèÿ ïîñëå çàâåðøåíèÿ àíàëèçà: 6 ìèí

Ñêîðîñòü ïðîòîêà: 0,5 ìë/ìèí

Òåìïåðàòóðà êîëîíêè: 42°Ñ

Ââîäèìûé îáúåì: 3–10 ìêë

Äåòåêòîð: ñ äèîäíîé ìàòðèöåé (îáíàðóæåíèå íà äëèíàõ âîëí 214 íì ïðè

øèðèíå ïîëîñû 15 íì; 230 íì ïðè øèðèíå ïîëîñû 20 íì; 245 íì ïðè

øèðèíå ïîëîñû 20 íì; êîíòðîëüíàÿ äëèíà âîëíû 400 íì, øèðèíà ïîëî-

ñû 80 íì)

Ýôôåêòèâíîñòü ðàññìàòðèâàåìîãî õðîìàòîãðàôè÷åñêîãî ìåòîäà

Ïðåäåë îáíàðóæåíèÿ: 0,01 ìêã/ã

Ïîãðåøíîñòü âðåìåíè óäåðæèâàíèÿ çà 10 ðàçãîíîê: ìåíåå 0,2%

Ïîãðåøíîñòü ïëîùàäè ïèêîâ çà 10 ðàçãîíîê: ìåíåå 1%

730 Ãëàâà V. Ïèùåâûå ïðîäóêò

2.3.5. Êàðáàìàòíûå ïåñòèöèäû

Óñëîâèÿ õðîìàòîãðàôè÷åñêîãî àíàëèçà

Ïðîèëëþñòðèðîâàííûé çäåñü ìåòîä âûñîêîýôôåêòèâíîé æèäêîñòíîé õðîìàòîã-

ðàôèè èñïîëüçîâàëñÿ äëÿ íåïîñðåäñòâåííîãî àíàëèçà ñîäåðæàíèÿ êàðáàìàòíûõ

ïåñòèöèäîâ â âîäå (ïðè ïîëüçîâàíèè ïîëó÷åíèåì ïðîèçâîäíûõ óæå ïîñëå ðàçäåëå-

íèÿ íà êîëîíêå) [63]. Èçâëå÷åíèå èç îâîùåé è ôðóêòîâ äîëæíî îáåñïå÷èâàòüñÿ

(ïðè íåéòðàëüíîì óðîâíå ðÍ) âîäîé; ëèøü ïîñëå ýòîãî âîçìîæåí õðîìàòîãðàôè-

÷åñêèé àíàëèç (ðèñ. V.26).

Ïîäãîòîâêà îáðàçöà: íèêàêîé ïîäãîòîâêè íå íóæíî

Êîëîíêà: ôàçà Ñ

(250 × 4 ìì; ðàçìåð ÷àñòèö 5 ìèêðîí); îò ôèðìû Pickering

Ïîäâèæíàÿ ôàçà: À — ñìåñü âîäû ñ ìåòàíîëîì (88:12)

Â — ìåòàíîë

Ãðàäèåíò: íà 2 ìèí 12% ìåòàíîëà

íà 42 ìèí 66% ìåòàíîëà

íà 46 ìèí 66% ìåòàíîëà

íà 46,1 ìèí 100% ìåòàíîëà

Ñòàíäàðòíûå çàðóáåæíûå ìåòîäèêè 731

Ðèñ. V.24. Àíàëèç ñîäåðæàíèÿ îñòàòî÷íûõ êîëè÷åñòâ ïåñòèöèäîâ â òðåõ ðàçíûõ îáðàçöàõ

ñàëàòà.

* Ñòåïåíü èçâëå÷åíèÿ êàðáåíäàçèìà îêàçûâàëàñü î÷åíü ìàëîé (îêîëî 40%)

Ðèñ. V.25. Àíàëèç îñòàòî÷íîãî êîëè÷åñòâà ïåñòèöèäîâ â äâóõ îáðàçöàõ ñòðó÷êîâîãî ïåðöà.

íà 49 ìèí 100% ìåòàíîëà

Ñêîðîñòü ïðîòîêà: 0,8 ìë/ìèí

Òåìïåðàòóðà êîëîíêè: 37°Ñ

Ââîäèìûé îáúåì: 10 ìêë ñìåñè ñòàíäàðòîâ

Äåòåêòîð: ôëóîðèìåòðè÷åñêèé

Âîçáóæäàþùàÿ äëèíà âîëíû 230 íì èëè 330 íì

Âîçáóæäåííàÿ äëèíà âîëíû 425 íì

Øèðèíà ùåëè, íàõîäÿùåéñÿ íà ïóòè âîçáóæäàþùåãî ñâåòà: 2 ìì (25 íì)

Øèðèíà ùåëè, íàõîäÿùåéñÿ íà ïóòè âîçáóæäåííîãî ñâåòà (ïåðâûé âàðè-

àíò): 4 ìì (50 íì)

Øèðèíà ùåëè, íàõîäÿùåéñÿ íà ïóòè âîçáóæäåííîãî ñâåòà (âòîðîé âàðè-

àíò): 4 ìì (50 íì)

Êîýôôèöèåíò óñèëåíèÿ ôîòîóìíîæèòåëÿ: 12

Îòñåêàþùèé ôèëüòð: 370 íì

×àñòîòà âñïûõèâàíèÿ ëàìïû: 55 Ãö (ëàìïà ïîñòîÿííî âêëþ÷åíà)

Âðåìÿ îòêëèêà: 4 ñåê

Íàñîñ, ïîäàþùèé ðåàêòèâ, èñïîëüçóåìûé äëÿ ïîëó÷åíèÿ ïðîèçâîäíûõ:

732 Ãëàâà V. Ïèùåâûå ïðîäóêò

Ðèñ. V.26. Ðàçäåëåíèå äâóõ ðàçëè÷íûõ ñìåñåé êàðáàìàòíûõ ïåñòèöèäîâ. Ñîîòâåòñòâèå

ïèêîâ:

Îáðàçåö À Îáðàçåö Á

1 — ñóëüôîêñèä áóòîêàðáîêñèìà 5 — îêñàìèë

2 — ñóëüôîêñèä àëüäèêàðáà 8 — ñóëüôîêñèä òèîôàíîêñà

3 — ñóëüôîí áóòîêàðáîêñèìà 10 — ñóëüôîí òèîôàíîêñà

4 — ñóëüôîí àëüäèêàðáà 11 — 3-îêñèêàðáîôóðàí

5 — ìåòîìèë 12 — ñóëüôîêñèä ìåòèîêàðáà

6 — ñóëüôîêñèä ýòèîôåíêàðáà 13 — ñóëüôîí ìåòèîêàðáà

7 — ñóëüôîêñèä ýòèîôåíêàðáà 16 — 3-êåòîêàðáîôóðàí

9 — ñóëüôîí ýòèîôåíêàðáà 18 — êàðáîôóðàí

14 — áóòîêàðáîêñèì 21 — 1-íàôòîë

15 — àëüäèêàðá 22 — òèîôàíîêñ

17 — ïðîïîêñóð 23 — ìåòèîêàðá

19 — êàðáàðèë

20 — ýòèîôåíêàðá

ñêîðîñòü ïðîòîêà ãèäðîëèçèðóþùåãî ðåàêòèâà (NaOH): 0,3 ìë/ìèí

ñêîðîñòü ïðîòîêà ðåàêòèâà, èñïîëüçóåìîãî äëÿ ïîëó÷åíèÿ ïðîèçâîäíûõ

(îðòîôòàëåâûé àëüäåãèä): 0,3 ìë/ìèí

Ýôôåêòèâíîñòü ðàññìàòðèâàåìîãî õðîìàòîãðàôè÷åñêîãî ìåòîäà

Ïðåäåë îáíàðóæåíèÿ: 1 ìêã/ë (ââîäèìîå êîëè÷åñòâî) äëÿ îòíîøåíèÿ ñèãíàëà ê

øóìó, ðàâíîãî 2

Ïîãðåøíîñòü âðåìåíè óäåðæèâàíèÿ çà 10 ðàçãîíîê: ìåíåå 0,1%

Ïîãðåøíîñòü ïëîùàäè ïèêîâ çà 10 ðàçãîíîê: ìåíåå 0,5–5%

2.3.6. Ãëèôîñàò

Óñëîâèÿ õðîìàòîãðàôè÷åñêîãî àíàëèçà

Ïðîèëëþñòðèðîâàííûé çäåñü ìåòîä âûñîêîýôôåêòèâíîé æèäêîñòíîé õðîìàòîã-

ðàôèè èñïîëüçîâàëñÿ äëÿ íåïîñðåäñòâåííîãî àíàëèçà ñîäåðæàíèÿ ãëèôîñàòà â

âîäå (ïðè ïîëüçîâàíèè ïîëó÷åíèåì ïðîèçâîäíûõ óæå ïîñëå ðàçäåëåíèÿ íà êîëîí-

êå) [64] ñì. ðèñ. V.27.

Ïîäãîòîâêà îáðàçöà: íèêàêîé ïîäãîòîâêè íå íóæíî

Êîëîíêà: êàòèîíîîáìåííèê â Ê+ ôîðìå (150 × 4 ìì; ðàçìåð ÷àñòèö 8 ìèêðîí;

îò ôèðìû Pickering

Ïîäâèæíàÿ ôàçà: À — 5 ìÌ ðàñòâîð KH

; ðÍ 2,0

Â — 5 ìÌ ðàñòâîð ÊÎÍ

Ñêîðîñòü ïðîòîêà: 0,4 ìë/ìèí

Ãðàäèåíò: íà 15 ìèí 0% Â

íà 17 ìèí 100% Â

Òåìïåðàòóðà êîëîíêè: 55%Ñ

Ââîäèìûé îáúåì: 50 ìêë ñìåñè ñòàíäàðòîâ

Äåòåêòîð: ôëóîðèìåòðè÷åñêèé

Âîçáóæäàþùàÿ äëèíà âîëíû 230 íì ïðè 330 íì

Âîçáóæäåííàÿ äëèíà âîëíû 425 íì

Øèðèíà ùåëè, íàõîäÿùåéñÿ íà ïóòè âîçáóæäàþùåãî ñâåòà: 2 ìì (25 íì)

Øèðèíà ùåëè, íàõîäÿùåéñÿ íà ïóòè âîçáóæäåííîãî ñâåòà (ïåðâûé âàðè-

àíò): 4 ìì (50 íì)

Øèðèíà ùåëè, íàõîäÿùåéñÿ íà ïóòè âîçáóæäåííîãî ñâåòà (âòîðîé âàðè-

àíò): 4 ìì (50 íì)

Êîýôôèöèåíò óñèëåíèÿ ôîòîóìíîæèòåëÿ: 12

Îòñåêàþùèé ôèëüòð: 370 íì

×àñòîòà âñïûõèâàíèÿ ëàìïû: 55 Ãö (ëàìïà ïîñòîÿííî âêëþ÷åíà)

Âðåìÿ îòêëèêà: 4 ñåê

Íàñîñ, ïîäàþùèé ðåàêòèâ, èñïîëüçóåìûé äëÿ ïîëó÷åíèÿ ïðîèçâîäíûõ:

ñêîðîñòü ïðîòîêà ãèäðîëèçèðóþùåãî ðåàêòèâà (OÑl

–

): 0,3 ìë/ìèí

ñêîðîñòü ïðîòîêà ðåàêòèâà, èñïîëüçóåìîãî äëÿ ïîëó÷åíèÿ ïðîèçâîäíûõ

(îðòîôòàëåâûé àëüäåãèä): 0,3 ìë/ìèí

Ñòàíäàðòíûå çàðóáåæíûå ìåòîäèêè 733